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模擬安捷倫1200 系列四元液相色譜儀分析抗組胺
閱讀：672 發布時間：2020-12-24摘要：安捷倫的智能系統模擬技術 (ISET) 可實現常規液相色譜系統分析方法的無縫轉移，例如 Agilent 1200 系列四元液相色譜儀到 Agilent 1260 Infinity II Prime 液相色譜儀。本應用簡報展示了 ISET 在分析五種抗組胺藥物方面的優勢。對不同實驗的保留時間與分離度進行評估，并與采用 1200 系列四元液相色譜儀獲得的原始數據進行比較。通過啟用 ISET，兩種系統獲得了良好的一致性。
前言從常規 HPLC 系統到 Agilent 1260 Infinity II Prime 液相色譜儀等 UHPLC 系統的分析方法轉移，對各種實驗室都是重要而且通常很關鍵的問題，對處于嚴格監管環境下的實驗室更是如此。UHPLC 系統與常規 HPLC 系統相比具有更低的系統延遲體積，并且通常會表現出不同的泵混合行為。這些特性可能會導致儀器間的方法轉移產生不同的保留時間 (RT) 和分離度。為避免對傳統分析方法進行費時又昂貴的重新驗證，可以在開始運行時配置等度保持或部署安裝額外延遲體積1 。而采用本方法時僅需要考慮延遲體積，而不用擔心兩種分析泵混合行為的差異。安捷倫的智能系統模擬技術 (ISET) 可實現無縫的方法轉移，并能夠獲得相似的色譜結果2 。通過啟用 ISET，無需改變分析方法或修改液相色譜系統就可以補償延遲體積和泵混合行為的差異。本應用簡報介紹了五種抗組胺藥物混合物的分離方法。首先將該藥物混合物在 Agilent 1200 系列四元液相色譜儀上進行分析。然后將分析方法轉移至 Agilent 1260 Infinity II Prime 液相色譜儀，并分別選擇啟用與不啟用 ISET 功能進行實驗。在額外實驗中使用 ISET 的微調選項來展示如何對分析方法轉移進一步優化。對保留時間與分離度進行評估，并與采用 1200 系列四元液相色譜儀的結果進行比較。
實驗部分儀器采用以下儀器對抗組胺藥物進行分析。 Agilent 1200 系列四元液相色譜儀： • Agilent 1200 系列四元泵 (G1311A) • Agilent 1200 系列自動進樣器 (G1329A) • Agilent 1200 系列柱溫箱 (G1316A) • Agilent 1200 系列二極管陣列檢測器 (G1315D) Agilent 1260 Infinity II Prime 液相色譜儀： • Agilent 1260 Infinity II 全能泵 (G7104C) • Agilent 1260 Infinity II Multisampler (G7167A)，配備集成式樣品冷卻裝置（選件 #100） • Agilent 1260 Infinity II 高容量柱溫箱 (G7116A) • Agilent 1260 II 二極管陣列檢測器 (G7117C)
軟件 Agilent OpenLAB CDS 2.2 (M8413A) 樣品五種抗組胺藥物混合物，每種濃度為 150 ng/µL（按洗脫順序排列）：曲吡那敏、氯苯那敏、丁卡因、異丙嗪和西替利嗪。化學品所有試劑均為液相色譜級。新制超純水產自配置 0.22 µm 膜式終端過濾器 (Millipak) 的 Milli-Q Integral 水純化系統。所有抗組胺藥物均購自 Sigma-Aldrich 公司 (St. Louis, USA)。
結果與討論：采用常規分析方法在 1200 系列四元液相色譜儀上使用填充 3.5 µm 填料的 4.6 × 75 mm 色譜柱對五種抗組胺藥物進行分析。首先，在不啟用 ISET 的狀態下將分析方法轉移至 1260 Infinity II Prime 液相色譜儀。與預期結果相同，所有五種分析物保留時間均明顯提前。接下來，啟用 ISET 功能。圖 1 所示為疊加色譜圖，包括使用 1200 系列四元液相色譜儀的原始色譜圖以及啟用和不啟用 ISET 時采用 1260 Infinity II Prime 液相色譜儀測得的兩幅色譜圖。使用 ISET 時，抗組胺藥物的 RT 能夠與原始色譜圖保持一致，并顯示 RT 偏差小于 3%，很好地滿足了 ISET 指標 5%2 的要求。相比之下，不使用 ISET 時，RT 偏移在 5% 至約 11% 之間。為進一步優化保留時間的一致性，需要激活 ISET 的微調功能。延遲體積偏移為 –50 µL 時，所有峰的保留時間略微提前。圖 2 所示為疊加色譜圖，包括原始色譜圖以及 ISET 激活與未激活微調功能時采用 1260 Infinity II Prime 液相色譜儀獲得的兩幅色譜圖。由于配置了微調功能，五種抗組胺藥物的 RT 與原始色譜圖一致，并顯示保留時間偏移的偏差小于 0.5%。表 2 所示為進行實驗的保留時間數據概覽。