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在UPLC-MS對肉中獸藥多殘留分析之前采用HLB小柱進行有效凈化
閱讀：1571 發布時間：2020-10-19目的：展示在UPLC®-MS分析之前采用Oasis® PRiME HLB小柱凈化肉類提取物的效率。
背景：沃特世(Waters®)為肉中獸藥多殘留沃特世液質聯用儀LC-MS/ MS篩查開發了優化的樣品前處理和分析方案。典型肉類樣品的主要成分是水(高達 70%)、蛋白質(15-25%)、脂肪(5-25%)和磷脂(1-3%)。在提取過程中，蛋白質可以通過沉淀和離心去除。然而，大量脂肪和磷脂會隨著目標物化合物一起提取出來。這些共提取物質的存在可能會干擾LC-MS分析，污染 UPLC系統的分析柱和其它組件，并且還會污染質譜儀。在過去，分析人員采用繁瑣的正己烷脫脂步驟或使用反相吸附劑(如硅膠C18) 從肉類提取物中去除脂肪。雖然這些技術可以有效去除脂肪，但均不能去除磷脂。
脂肪和磷脂對儀器和色譜柱而言是非常棘手的潛在污染物。Oasis PRiME HLB小柱提供了一種在LC-MS分析前對肉類提取物進行快速凈化以去除這些物質的方法。
解決方案：使用Oasis PRiME HLB小柱通過式凈化可以從肉類提取物中高效地去除脂肪和磷脂。同樣重要的是，Oasis PRiME HLB小柱凈化不會影響獸藥的回收率。該方法的回收率與使用正己烷脫脂法或硅膠C18凈化法得到的回收率相當，但使用Oasis PRiME HLB 小柱時的凈化效率更高。
實驗初步提取。從獸藥中選擇具有代表性的化合物，稱取5 g豬肉樣品(含15%脂肪)并勻漿，加入10 mL含0.2%甲酸的乙腈/水(80:20) 進行提取。將樣品渦旋混合30秒、振搖30分鐘，然后在12000 rpm下離心5分鐘。 Oasis PRiME HLB小柱凈化。 將Oasis PRiME HLB小柱(3 cc, 60 mg)安裝在預先清潔過的真空導管上。無需執行小柱活化步驟。取約0.5 mL的上清液，使其通過Oasis PRiME HLB小柱并收集濾液。進行UPLC-MS/MS分析之前，用10 mM甲酸銨緩沖溶液 (pH 4.5)將收集到的樣品稀釋3倍。
結果：所有被測化合物在通過式凈化步驟中均無損失或損失極少。除保泰松(32%)外，其余被測化合物的回收率(主要通過測量初始液相提取步驟的效率所得)的平均值超過了80%。上述回收率與使用硅膠C18凈化方法的結果相當，但硅膠 C18不能去除磷脂。UPLC-MS/MS條件和色譜圖如圖1所示。圖2所示的色譜圖展示了Oasis PRiME HLB小柱去除磷脂的效率；它比硅膠C18凈化方法多去除了90%以上的磷脂。通過重量分析，我們還測得Oasis PRiME HLB小柱去除了豬肉提取物中90%以上的共提取脂肪。
結論 ■ Oasis PRiME HLB小柱在使用前不需要活化或平衡；其簡單的一步式SPE凈化非常有效。 ■ Oasis PRiME HLB小柱去除了豬肉樣品的乙腈提取物中 90%以上的脂肪和磷脂。 ■ 采用Oasis PRiME HLB小柱通過式的凈化不會影響待測化合物的回收率，還能有效去除提取物中的脂肪和磷脂。