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改善對(duì) 37 種脂肪酸甲酯的分析--安捷倫氣相色譜
閱讀：1387 發(fā)布時(shí)間：2020-8-5前言： 脂肪在食品營(yíng)養(yǎng)與食品化學(xué)領(lǐng)域的研究中發(fā)揮著重要作用。脂 肪由復(fù)雜的脂肪酸混合物組成，包括飽和、單不飽和以及多不 飽和的各種碳鏈長(zhǎng)度的化合物。由于脂肪酸在體內(nèi)的作用取決 于結(jié)構(gòu)的不同，因此有必要對(duì)食品中含有的脂肪酸進(jìn)行詳細(xì)的 組成分析。測(cè)定食品中的總脂肪與反式脂肪含量時(shí)，對(duì)脂肪酸 及其甲酯衍生物 (FAME) 的氣相色譜分析是脂肪表征的重要工 具1,2。不同的固定相以及其他色譜柱規(guī)格（如色譜柱長(zhǎng)度、內(nèi) 徑和膜厚）的選擇主要取決于脂肪酸組成的復(fù)雜性與分離的具 體要求。 常規(guī)情況下，使用聚乙二醇 (PEG) 型毛細(xì)管柱對(duì)海洋魚(yú)油和肉 類樣品進(jìn)行 FAME 分析，包括測(cè)定乳脂中的丁酸。這是因?yàn)?PEG 毛細(xì)管柱能夠根據(jù)碳鏈長(zhǎng)度和不飽和度分別洗脫 FAME 異構(gòu)體。而據(jù)報(bào)道，PEG 色譜柱有一個(gè)嚴(yán)重局限，就是無(wú)法 實(shí)現(xiàn)順式-反式的分離。所有的順?lè)串悩?gòu)體均會(huì)發(fā)生共洗脫3 。
許多常規(guī)的食品檢測(cè)方法中，在使用 GC/FID 測(cè)定脂肪酸組成 時(shí)都要求對(duì)特定的順?lè)粗舅岙悩?gòu)體進(jìn)行分離。分析食用油等 更復(fù)雜的樣品時(shí)，使用涂覆氰丙基固定相的毛細(xì)管柱能夠獲 得出色的分離度。具有中等含量氰丙基固定相的 Agilent J&W DB-FastFAME 色譜柱能夠?qū)崿F(xiàn)復(fù)雜 FAME 混合物的快速出色 分離以及某些順?lè)串悩?gòu)體的分離。如果需要實(shí)現(xiàn)更精細(xì)的順 反分離，強(qiáng)極性的氰丙基聚硅氧烷型色譜柱（CP-Sil 88 FAME 分析柱/HP-88 柱）。而在氰丙基聚硅氧烷固定相 上，一些碳鏈長(zhǎng)度經(jīng)常重疊，引起峰識(shí)別問(wèn)題。因此需要較長(zhǎng) 的氣相色譜柱（如 100 m）和較長(zhǎng)的分析時(shí)間來(lái)實(shí)現(xiàn)良好分 離，但這又會(huì)導(dǎo)致效率低下。
37 組分 FAME 混標(biāo)專門(mén)為模擬多種食品樣品的脂肪酸組成而 設(shè)計(jì)，可用于鑒定多種食品中的關(guān)鍵脂肪酸甲酯 (FAME)。該 混標(biāo)中包含 C4:0 至 C24:1 范圍的 FAME，包括多數(shù)重要的飽 和、單不飽和多不飽和 FAME（表 1）。 本應(yīng)用簡(jiǎn)報(bào)介紹了使用以下三種類型 FAME 分析毛細(xì) 管柱對(duì) 37 組分 FAME 混合物進(jìn)行分析：Agilent J&W CP-Sil 88 FAME 分析柱、DB-FastFAME 柱和 Agilent J&W DB-FATWAX 超高惰性氣相色譜柱。
實(shí)驗(yàn)部分 ：試劑與標(biāo)準(zhǔn)品 37 組分 FAME 混標(biāo)（部件號(hào) CDAA-252795-MIX-1 mL）購(gòu)自 上海安譜科學(xué)儀器有限公司。表 1 列出了混合物中每種組分 的濃度。 PUFA（來(lái)自海洋）、PUFA No.2（來(lái)自動(dòng)物）和 PUFA No.3（來(lái)自鯡魚(yú)油）購(gòu)自深圳市明博林生物科技有限公司。 混合物為 100 mg 凈混合物，分別用丙酮稀釋 100 倍。 儀器 使用配備火焰離子化檢測(cè)器 (FID) 的 Agilent 7890B 氣相色譜 儀進(jìn)行分析。使用配備 5 µL 進(jìn)樣針（部件號(hào) G4513-80213） 和分流/不分流進(jìn)樣口的 Agilent 7683B 自動(dòng)液體進(jìn)樣器進(jìn)樣。 儀器配置與分析條件總結(jié)于表 2（CP-Sil 88 FAME 柱）、 表 3（DB-FastFAME 色譜柱）、表 4（高效 DB-FastFAME 色譜 柱）和表 5（DB-FATWAX UI 色譜柱）。表 6 列出了本研究中 使用的其他備件。
結(jié)果與討論： 強(qiáng)極性氰丙基聚硅氧烷固定相（如 CP-SIL 88 FAME 柱或 HP-88 柱），是專門(mén)以改善順?lè)词?FAME 分離為目的進(jìn)行設(shè)計(jì) 的。之前的研究中成功地證明了強(qiáng)極性氰丙基聚硅氧烷色譜柱 對(duì)反式脂肪酸的測(cè)定效果。然而，很多應(yīng)用中 37 組分 FAME 分析的洗脫圖案都出現(xiàn)顯著的碳鏈重疊，例如，C18:3n6、 C18:3n3 和 C20:0；C20:3n3、C22:1n9 和 C20:4n63 。這會(huì)導(dǎo) 致峰的識(shí)別出現(xiàn)問(wèn)題。圖 1 顯示使用 CP-Sil 88 FAME 分析專 用柱和 GC-FID 以優(yōu)化方法分離 37 組分 FAME 參比標(biāo)樣獲得 了優(yōu)異的選擇性；所有 37 個(gè)組分均在一次運(yùn)行中達(dá)到基線 分離。 為了使 37 組分 FAME 混標(biāo)中的所有化合物都獲得良好的分離 度，實(shí)驗(yàn)中選擇了 100 m 的 CP-Sil 88 FAME 分析氣相色 譜柱，并將分析時(shí)間延長(zhǎng)至 70 分鐘以上。