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關于何時使用HILIC 與反相液相色譜柱的詳細研究
閱讀：1203 發布時間：2020-6-16摘要：本研究考察了何時使用親水相互作用液相色譜 (HILIC) 以及何時使用反相液相色譜(RPLC) 柱分析難以保留的極性小分子和離子化分子。所示數據表明了分析物/樣品、流動相、檢測模式和其他方法適用性要求（保留性、分離度、靈敏度和峰形）的影響。
前言： 使用反相液相色譜法充分保留和分離極性 小分子是一項具有挑戰性的任務。烷基固 定相液相色譜柱（例如 C18）通常是液相 色譜方法開發。然而，高極性分析 物對非極性 C18 固定相的親和力較低， 保留性較差。我們可以探索幾種能夠在反 相模式下保留這些化合物的技術，例如， 向流動相添加離子對試劑或對分析物進行 衍生化。離子對試劑會污染液相色譜柱和 系統，一般不適用于 LC/MS。通常也不 建議采取衍生化操作，因為這是一個繁瑣 的額外步驟，會增加樣品的前處理時間， 并可能導致錯誤和重現性問題。
要想成功地保留和分離極性分析物，一個更好的做法是探索各種固定鍵合相。部分鍵合相非常適合棘手的極性分析物。在反相模式下，存在極性更高的鍵合相，它們使極性分析物與固定相之間的相互作用變得更強。其中許多固定相也可用于非常弱的流動相，如 100% 水相，從而更好地保留極性化合物。除了反相鍵合相，市面上還有幾種親水相互作用液相色譜 (HILIC) 柱固定相。HILIC 模式使用極性固定相保留極性化合物。在給定的分析中，哪一種色譜柱和哪一種液相色譜模式是選擇，可由其他方法因素決定，包括分析物溶解度、流動相和檢測模式。
現代液相色譜柱通常填充表面多孔顆粒填 料，這種填料以其在低反壓下的高柱效而 聞名。高柱效有助于分離相鄰洗脫峰，而 低反壓使液相色譜儀更具靈活性。 本研究展示了一種合乎邏輯的逐步式方 法，使化學家能夠利用表面多孔顆粒填料 液相色譜柱實現對極性分析物的保留、分離和檢測。
實驗部分：本實驗采用 Agilent 1290 Infinity II 液相色譜系統與 Agilent Ultivo LC/TQ。對標準配置的系統進行了改進，以減小系統體積和擴散。表 1 示出了配置詳情。
結論：找到能保留和分離所有分析物的色譜柱。 • RPLC 不能保留所有極性/離子化分析物；HILIC 可能適用于這些分析物 • 某些分析物在這兩種液相色譜模式下均可實現同樣出色的保留和分離考慮樣品：分析物溶解度和樣品溶劑。 • 在 RPLC 和 HILIC 中進樣強溶劑，均會對色譜分析質量產生不利影響 • 隨著進樣量的增加，強溶劑影響更嚴重 • 相比乙腈，極性化合物通常更易溶于水，這對 RPLC 是有利的
可使用哪種檢測器？ • 確保分析物與所選檢測器兼容，并且滿足靈敏度要求 • HILIC 可以改善 LC/MS 分析，因為流動相更易揮發 • UV 和 RPLC 與多種流動相兼容，這可以改善分析物的保留和分離特性選擇 HILIC 還是 RPLC 是一種平衡考量，需要仔細考慮色譜分離要求、分析物極性和溶解度、樣品溶劑的性質以及可用的檢測方式。