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藥品中潛在致突變性雜質的痕量水平
閱讀：874 發布時間：2020-6-3摘要：本應用簡報重點介紹了一種分析方法，用于精確定量兩種潛在致突變性雜質 3-氨基吡啶和異煙酰胺，這兩種雜質可由達伐吡啶中的活性藥物成分 (API) 4-氨ji吡啶形成。Agilent Ultivo LC/TQ 具有混合模式采集功能，通過該功能可以同時采集樣品的定量（SIM 和 MRM）及定性信息（全掃描和產物離子掃描）。混合模式的工作原理是將掃描功能與目標分析物的 SIM 或 MRM 整合到同一時間段內。實驗表明該方法具有優異的靈敏度和精度，潛在致突變性雜質的定量限遠低于法規要求。
前言：在 API 的生產過程中，具有致突變性的原料或副反應產物可能會存在于生產批次中。這些致突變性雜質可能會被引入到終產品中，因此，必須對生產批次中的潛在致突變性雜質 (PMI) 進行篩查。在本分析方法中，我們分析了達伐吡啶中的 API，即 4-氨ji吡啶產生的 3-氨基吡啶和異煙酰胺。達伐吡啶的標準劑量為 20 mg/天，意味著總 PMI 需要精確檢測到低于 75 ppm（毒理學關注的 PMI 閾值 = 1.5 µg/天）[1,2]。本應用簡報展示了在高濃度的 API 中，使用具有混合模式采集功能的 Ultivo LC/TQ 分析的兩種 PMI ― 3-氨基吡啶和異煙酰胺的定量分析。通常，這種類型的分析需要用到 LC/UV 或單四極桿 LC/MS。然而，使用 LC/TQ 可以更精確地定量分析，因為該系統提高了尋找已知雜質的特異性，且因為降低了化學噪音而具有更高的靈敏度。Ultivo 的混合模式采集功能允許在同一時間段內同時采集 MRM、SIM、產物離子掃描、母離子掃描和中性丟失掃描數據。這種混合模式功能允許用戶收集更多信息，并可在一次進樣中精確定量目標化合物。根據法規的靈敏度要求，標準 ESI 離子源是本應用經濟合理的選擇。
這種方法的一個難題是需要從相對高濃度的 API 中檢測 PMI 化合物。分離度在此方法中非常重要，因為雜質后洗脫的 API 濃度很高。由于此方法中的分析物具有親水性，故它們在傳統反相色譜柱上的保留性較差。因此，我們采用*的親水相互作用液相色譜柱（Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 色譜柱）分離分析物。后，當 API 從色譜柱中洗脫時，液相色譜流路被移出 MS，避免了離子源的潛在污染和質譜檢測器的飽和。
實驗部分：試劑與化學品本應用簡報中使用的所有試劑均為 HPLC 或 LC/MS 級。乙腈購自 Honeywell (Morristown, NJ, USA)。超純水產自配置 LC-Pak Polisher 和 0.22 µm 終端膜式過濾器 (Merck, Darmstadt, Germany) 的 Milli-Q Integral 水純化系統。甲酸購自 Fisher Scientific (Fair Lawn, NJ, USA)，5 mol/L 甲酸銨溶液購自安捷倫科技公司 (Santa Clara, CA, USA)（部件號 G1946-85021）。藥物和雜質標準品購自 Millipore-Sigma (Merck, Darmstadt, Germany)。
樣品前處理使用 20 mg/mL 的 4-氨ji吡啶溶液作為雜質的基質。用乙腈將 4-氨ji吡啶稀釋至 20 mg/mL。用乙腈將 3-氨基吡啶和異煙酰胺溶解并稀釋到 10 µg/mL 的儲備液濃度。用 20 mg/mL 的 4-氨ji吡啶儲備液進行連續稀釋，得到 3-氨基吡啶和異煙酰胺的校準曲線。
儀器和實驗參數 ：Agilent 1260 Infinity II Prime 液相色譜系統 • 1260 Infinity II 全能泵 (G7104C) • 1260 Infinity II 樣品瓶進樣器，帶有集成式柱溫箱 (G7129A) • 1260 Infinity II 二極管陣列檢測器 HS (G7117C) Agilent Ultivo 三重四極桿液質聯用系統 • 電噴霧離子源 (G1948B)