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LC-MS/MS色譜流動相的制備

1M甲酸銨溶液：稱取63g甲酸銨，溶于1L HPLC級的水中。

流動相A：在1L水 (HPLC級) 中加入 5mL 1M甲酸銨溶液。

流動相B：在1L甲醇 (HPLC級) 中加入 5mL 1M甲酸銨溶液。

 

樣品制備（水果與蔬菜基質）

基于Anastassiadies等人提出的方法[1]：

1. 稱量10g切碎的樣品；

2. 加入100µL 內標溶液(D5 - Atrazine 1µg/mL)；

3. 加入10mL乙腈，劇烈振搖；

4. 加入4g無水MgSO4和1g的NaCl；

5. 馬上渦旋混合，以防止MgSO4共聚物的生成；

6. 振搖30s后，4300r/min離心5min；

7. 取出1mL初提液，轉移至含有150mg無水MgSO4的離心管中；

8. 混合，5200r/min 離心1min；

9. 取出500µL上清液，用水將稀釋到1mL，得到提取液濃度約為0.5g/mL。

 

基LC-MS/MS于Klein和 Alder等人提出的方法[2, 3]：

1. 在5g或10g樣品中，加入水到10mL；

2. 加20mL甲醇，使用UltraTurrax 組織勻漿機勻漿2min；

3. 有時需要過濾或離心；

4. 加入NaCl 溶液 (100mL水中含20g NaCl)，每6mL加入NaCl溶液2mL；

5. 用5mL樣品溶液浸泡 ChemElut 柱；

6. 5min后，用16mL二氯甲烷洗脫；

7. 40℃揮發至干；

8. 用甲醇與水的混合溶液1.25mL (甲醇0.25mL，水1mL) 重新溶解；

9. 用0.45µm濾膜過濾。

 

基于Lehotay et al.[4]提出的方法：

1. 使用Molinex 混合器或類似設備勻質水果或蔬菜樣品；

2. 加入乙腈，(15.0±0.05)g 勻質的樣品加乙腈15mL，超聲提取2min后，混旋5min；

3. 加入6g無水MgSO4和1.5g NaCl的混合物，劇烈振搖1min；

4. 3000r/min 離心5min；

5. 取5mL上層溶液，加入1.8g 無水MgSO4和0.3g Bondesil C8 吸附劑；

6. 振搖20s；

7. 使用Eppendorf 5301型濃縮儀，或類似設備揮發至干；

8. 用乙腈/水＝1/9的溶液1mL重新溶解樣品；

9. 12000r/min 高速離心2min；

10. 上清液轉入自動進樣器的進樣瓶中備用

 

 

色譜分離條件

Agilent 1100 系統：G1312A二元泵系統、G1367A型自動進樣器、柱溫箱。

色譜柱：Phenomenex Synergi Fusion-RP反相柱，50mm×2mm，粒徑4µm，內孔80Å。

流動相：

A相—水+5mM 甲酸銨；

B相—甲醇+5mM 甲酸銨。

梯度設置：

LC-MS/MS液質聯用儀檢測

API 3200™或3200 QTRAP® LC-MS/MS液質分析系統。TurboIonSpray® 離子源，負離子模式，MRM掃描方式。