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TSQ Altis三重四極桿對(duì)血漿中候選藥物混合物進(jìn)行靈敏的定量分析
閱讀：801 發(fā)布時(shí)間：2019-5-21目的：為檢測(cè)和定量人血漿中目標(biāo)制劑混合物開(kāi)發(fā)一種靈敏、耐用和可重現(xiàn)的 LC-MS/MS 分析 方法
前言：在大多數(shù)制藥企業(yè)中，小分子候選藥物作為新化學(xué)實(shí)體或仿制藥，占據(jù)了藥物發(fā)現(xiàn)管道 的大部分比例。目標(biāo)定量分析是工作流程的一個(gè)關(guān)鍵組成部分，其要求成功開(kāi)發(fā)出 小分子藥物。而這些目標(biāo)定量分析必須在生物基質(zhì)中完成，因此，常常帶來(lái)分析挑戰(zhàn)。 在本項(xiàng)研究中，我們報(bào)道了為大鼠血漿中多個(gè)藥物標(biāo)準(zhǔn)品開(kāi)發(fā)的靈敏、耐用、可靠和可 重現(xiàn)的 LC-MS/MS 分析方法。
實(shí)驗(yàn)：樣品制備 采用乙腈（ACN): 血漿 =3:1 破壞血漿，從而制備已破壞的血漿 儲(chǔ)備液。將制備的溶液在 10,000 rpm 下離心 10 分鐘。去除上 清液，并加入等體積的水，終得到已破壞血漿的儲(chǔ)備原液。 將已破壞血漿儲(chǔ)備混合液中每種標(biāo)準(zhǔn)化合物濃度為 1 mg/mL 的 儲(chǔ)備液稀釋至
1 pg/mL–25,000 pg/mL 和 10 pg/mL-100,000 pg/mL。將同位 素標(biāo)記的內(nèi)標(biāo)化合物加入到每個(gè)校正水平上，從而得到終濃 度為 0.5ng/mL 的內(nèi)標(biāo)溶液。所有試劑均購(gòu)自 Cerilliant 公司（朗 德羅克，得克薩斯州），濃度為 1 mg/mL 的甲醇溶液。
液相色譜法：采用 Thermo ScientificTM VanquishTM Horizon HPLC 系統(tǒng) 進(jìn)行色譜分離。所使用的色譜柱為 Thermo ScientificTM Hypersil GOLDTM aQ C18 極性封端 LC 色譜柱（100 × 2.1 mm，1.9 µm 粒徑）。流動(dòng)相 A 和 B 分別為 10 mM 甲 酸銨水溶液（采用 Fisher ChemicalTM OptimaTM 級(jí)純水） 和 0.1% 甲酸乙腈溶液。柱溫為 50 ℃。總運(yùn)行時(shí)間為 3.5 分鐘（表 1）。
質(zhì)譜分析法 采用 Thermo ScientificTM TSQ AltisTM 三重四極桿質(zhì)譜儀進(jìn)行質(zhì) 譜分析，配置 Thermo ScientificTM OptaMaxTM NG 離子源室。 表 2 和表 3 顯示了實(shí)驗(yàn)設(shè)置中使用的質(zhì)譜儀離子源和 SRM 參 數(shù)。
數(shù)據(jù)分析 采用 Thermo ScientificTM TraceFinderTM 軟件采集并處理數(shù)據(jù)。
結(jié)果與討論：研究發(fā)現(xiàn)，采用 TSQ Altis MS 測(cè)得的每個(gè)候選藥物的定量下限 （LLOQ）明顯低于采用以前幾代 MS 系統(tǒng)的測(cè)量值（表 4）。 此外，內(nèi)標(biāo)化合物的 %CV 值顯著降低也意味著 TSQ Altis 質(zhì)譜 的耐用性和重現(xiàn)性更優(yōu)。300 pg/mL QC 2 的典型色譜圖見(jiàn)圖 1。 QC 線性和重現(xiàn)性的更多詳細(xì)信息見(jiàn)表 5
