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論文分享|Revvity LabChip GXII微流控蛋白電泳在雙抗檢測中的應用

2024-2-29  閱讀(225)

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雙抗相比于單抗,雙抗的表達過程會存在很多副產物,如半抗體、3/4抗體、同源二聚體、輕鏈缺失、單臂缺失及聚集體等,這些副產物的存在會嚴重干擾雙抗的有效性以及安全性。

藥明康德發表了pH-鹽雙梯度洗脫法在MMC ImpRes混合模式層析純化基于WuXiBody雙特異性抗體的應用,該論文使用LabChip GXII Touch HT儀器用于非還原CE-SDS分析。

WuXiBody是由藥明康德開發的新型雙特異性抗體(bsAb)。它的關鍵特征是用T細胞受體(TCR)恒定域取代了一個親本mAb的CH1 / CL恒定區,該設計旨在促進同源重鏈(HC)-輕鏈(LC)配對。



下面我們一起來看看 LabChip 在雙抗純化檢測中發揮了什么作用呢?

檢測流程

LabChip GXII Touch HT用于非還原CE-SDS分析,所用芯片是Express。

蛋白質樣品、標準、空白和Ladder在70℃加熱10 min,然后上機LabChip GXII Touch HT 進行分析(每個run用2 μg樣品)。

結果展示

Protein A洗脫液,經LabChip分析非還原CE-SDS。半抗體占16.7%,單臂缺失占1.8%,輕鏈缺失占8.5%。




MMC ImpRes洗脫液的純度達到98.1%,與Protein A洗脫液,副產物A、B和C的百分比分別從16.7%、1.8%和8.5%下降到0.3%、0.6%和0.4%。



如下表所示,非還原的CE-SDS和SEC-HPLC分析進一步表明,MMC ImpRes洗脫液的純度分別為98.1%和98.8%。



總結

在這項工作中,作者證明了在pH-鹽雙梯度洗脫下進行的MMC混合層析比在pH/鹽單洗脫下提供了更高的分辨率梯度洗脫,有效地去除單梯度洗脫不能去除的副產物,LabChip GXII Touch HT助力非還原CE-SDS分析。


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