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內毒素檢測-重組C因子法的原理及操作步驟!

2023-11-27  閱讀(373)

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一,重組C因子法原理

PyroGene™重組因子C試劑盒是一種不含動物制品的LAL替代方案,FDA已許可將其作為一種替代方法。它基于一種重組產生的C因子(rFC),C因子是馬蹄蟹凝血級聯反應中的第一個組成部分。 它由內毒素結合激活。然后,產生的活性成分發揮作用,裂解合成底物,釋放熒光。反應在96孔板中操作,使用380/440nm的激發/發射波長,在時間零點和一小時孵育后,在熒光酶標儀中以37°C ± 1°C孵育的時間零點和一小時后,分別測量熒光。



比較細菌內毒素檢測試劑盒中的擴增方法

對一小時讀數和零時讀數之間的差 (?RFU)進行校正,用于陰性對照 ?RFU熒光。凈熒光的對數與內毒素濃度的對數成正比,并且在0.005-5.0 EU/ml范圍內呈線性。樣品中內毒素的計算與標準曲線有關。



三,重組C因子法檢測所需主要設備、材料

試劑

– rFC酶溶液

– 熒光底物

– rFC定緩沖液

– 內毒素工作標準品 (CSE)

– LAL 試劑檢查用水(即LRW)(# W50-640, W50-100, W50-500)

器具

– 玻璃稀釋管(# N207)

– 獨立包裝的血清吸管(選購)

– 標簽

– 96-微孔板 (# 25-340)

– 試劑槽(# 00190035)

請使用經內毒素試驗驗證合格的無熱原器具。

設備和軟件

– 八道移液器

– 孵育熒光酶標儀

– WinKQCL™軟件

– 移液器

– 計時器

– 漩渦混合器

三,操作步驟



注意事項

– 使用匹配的試劑

– 使用玻璃管制作內毒素稀釋液[不推薦使用塑料管]

– 遵循所有關于內毒素漩渦震蕩次數的建議

– 使用經內毒素試驗驗證合格的無熱原器具

– 使用前,先使試劑溫度與室溫保持相同

– 不要旋轉工作試劑

– 將試劑放入96-微孔板的孔中時,避免產生氣泡

– 不要污染樣品、標準品、LRW 和器具

– 應正確安裝、驗證并維護設備儀器

瑋馳相關產品

設備和軟件

品牌貨號說明
Lonza25-345SPyroWave™ XM熒光酶標儀
Lonza25-611符合FDA PART 11認證的軟件WinKQCL, 也包含一個儀器許可證

重組因子C終點熒光試劑盒

品牌貨號名稱規格靈敏度(EU/ml)
Lonza50-658UPyroGene™ 重組因子C終點熒光試劑盒192次測試0.005至5
Lonza50-658NVPyroGene™ 重組因子C終點熒光試劑盒2880次測試0.005至5

無熱原試管

品牌貨號名稱規格
LonzaN207無熱原試管30/鋁箔包
LonzaN201無熱原試管50/箱
LonzaN205無熱原試管50/鋁箔包

無熱原96孔板

品牌貨號名稱規格
Lonza25-340無熱原96孔板內毒素測試<0.0005EU/孔,50/箱

試劑槽

品牌貨號名稱規格
Lonza190035LAL試劑槽<0.005EU/ml,10/包

無熱原吸頭

品牌貨號名稱規格
LonzaBE25-415Eppendorf® 2-200μl Biopur™ 移液管吸頭<0.001 EU/mL,5個托盤/pkg;96個吸頭/托盤
LonzaBE25-417Eppendorf® 50-1000μl Biopur™ 移液管吸頭<0.001 EU/mL,5個托盤/pkg;96個吸頭/托盤


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