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介紹蛋白質(zhì)定量分析的兩種分析方法

2022-8-27  閱讀(953)

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  蛋白質(zhì)定性分析通常是指利用質(zhì)譜法進(jìn)行蛋白質(zhì)鑒定和序列分析。蛋白質(zhì)定性分析分為top-down分析和bottom-up分析兩種策略。目前,bottom-up分析策略被更廣泛的應(yīng)用于蛋白質(zhì)定性分析工作。
  Bottom-Up(自底向上)和Top-Down(自頂向下)兩種策略“自底向上”策略是指通過(guò)分析由蛋白質(zhì)酶解生成的肽段來(lái)鑒定蛋白質(zhì)。當(dāng)應(yīng)用該策略來(lái)分析蛋白質(zhì)組混合物時(shí),因其類似于基因組測(cè)序的,所以又被稱為白質(zhì)組學(xué)(Shot-gunProteomics)。“自頂向下”策略直接鑒定完整蛋白質(zhì),在翻譯后修飾和蛋白質(zhì)同素異構(gòu)體鑒定方面有一些潛在的優(yōu)勢(shì)。可是該策略的缺陷是蛋白質(zhì)在氣相中分離、電離及碎裂都十分困難。而蛋白質(zhì)組學(xué)由于將蛋白質(zhì)酶解成肽段,使其在氣相中更容易被分離、電離和碎裂。
  2.蛋白質(zhì)定量分析:確定樣品中總蛋白含量,或者某種單一蛋白成分的含量。
  一、蛋白質(zhì)相對(duì)定量分析
  相對(duì)定量的目的是測(cè)定目的蛋白在兩個(gè)或多個(gè)樣本中的表達(dá)量的相對(duì)比例,而不需要知道它們?cè)诿總€(gè)樣本中的表達(dá)量。例如,如果研究項(xiàng)目中包括處理過(guò)的和未經(jīng)處理的對(duì)照樣本,通常可以將未經(jīng)處理的樣本做為對(duì)照組,經(jīng)處理的樣本的定量結(jié)果除以對(duì)照樣品的定量結(jié)果,就可以計(jì)算各個(gè)處理樣本的蛋白含量相對(duì)于對(duì)照組樣品的百分比。
  二、蛋白質(zhì)定量分析
  目前基于質(zhì)譜的定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究主要是指靶向蛋白質(zhì)組學(xué)。靶向蛋白質(zhì)組學(xué)分析,是指對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)(或修飾肽段)進(jìn)行定性和/或定量分析,或者用于驗(yàn)證大規(guī)模蛋白質(zhì)組學(xué)的結(jié)果。基于質(zhì)譜的靶向蛋白質(zhì)組學(xué)分析方法,由于沒有物種限制并具備多目標(biāo)同時(shí)分析能力等優(yōu)勢(shì),受到越來(lái)越多的關(guān)注和應(yīng)用。其技術(shù)方法經(jīng)歷了從傳統(tǒng)的SRM/MRM(選擇性/多反應(yīng)監(jiān)視,selected/multiplereactionmonitoring)到PRM(平行反應(yīng)監(jiān)視,parallelreactionmonitoring)的發(fā)展歷程。
  定量蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)用方向:驗(yàn)證定量蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果、驗(yàn)證翻譯后修飾蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果、目標(biāo)蛋白質(zhì)/相對(duì)定量分析、診斷標(biāo)志物靶向篩選、診斷標(biāo)志物驗(yàn)證與定量、驗(yàn)證基因表達(dá)產(chǎn)物。

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