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淺析三種單細胞培養的異常原因分析

閱讀:331        發布時間:2022-10-21
  單細胞培養真是一件特別心累的事,不知不覺間可能就會出現很多問題,細胞不長了、不貼壁了......實在讓人操碎了心。今天,美國Namocell公司就對單細胞培養過程中常見的異常進行分析。
  
  一、培養細胞不貼壁
  
  可能原因:
  
 ?、僖鹊鞍酌赶^度;②支原體污染;③培養基pH值過堿(NaHCO3分解);④細胞老化;⑤接種細胞起始濃度太低或太高。
  
  解決方法:
  
 ?、倏s短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度;②分離培養物,檢測支原體。清潔支架或培養箱。如發現支原體污染,丟棄培養物;③使用無菌醋酸溶液調整pH值或充入無菌CO2;④啟用新的保種細胞;⑤調節接種細胞濃度。
  
  二、懸浮細胞成簇
  
  可能原因:
  
 ?、倥囵B液中含鈣,鎂離子;②支原體污染;③蛋白酶過度消化使得細胞裂解;④DNA污染。
  
  解決方法:
  
  ①用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細胞,輕巧吹吸;②細胞獲得單細胞懸液;③分離培養物,檢測支原體;④DNasel處理細胞。
  
  三、細胞生長不好
  
  可能原因:
  
  細胞本身的狀態
  
  ①細胞傳代次數多,細胞老化;②細胞的接種量:接種量過低,細胞生長緩慢;③細胞傳代時間過晚:細胞中毒,影響傳代后的細胞生長;④胰酶消化時間過長或過短:時間過長,細胞死亡;時間過短,細胞未*分離而成團,細胞死亡;⑤細胞的凍存與復蘇:慢凍速溶。

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