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淺談單克隆篩選的特點和篩選方法
閱讀：4883 發布時間：2022-5-6
單克隆篩選是根據細胞所具有的特性將單個細胞從混合的細胞樣品中分離出來的?種技術，是抗體制備細胞株優化、穩轉細胞株構建、藥物靶點篩選等應?中重要的?環，能夠更好地為不同鄰域科學研究和藥物研發提供支持。
一、特點：
1、通用性篩選：適用于多種細胞，無需攜帶抗性熒光標簽。
2、單列線性模式：適用于高價值細胞。
3、提供克隆性證據：可為每個克隆提供克隆形成圖像。
4-溫和的微流控技術：更高存活率，更低損失率。
二、單克隆篩選的方法
1、有限稀釋法：克隆/亞克隆：分離單個細胞置入多孔培養板的每個孔中培養。然后,用ELISA檢測培養上清來判斷是否有產生目的抗體的單克隆生成。
2、檢測每孔細胞是否產生針對目的抗原表達的抗體，所以篩選的條件是兩層意思：單個細胞單孔培養保證每個孔中的細胞在產生抗體時是針對同一抗原的同一抗原決定簇產生的的，但每個孔中細胞卻不一定都能產生抗體，把那些不產生抗體的細胞淘汰，對能分泌針對抗原某一決定簇抗體的陽性細胞選擇下來繼續克隆，從而保證大量的生產所需抗體。
3、對選擇下來的細胞進行克隆方法有兩種：一種可以在體外培養；一種可以一直到小鼠腹腔中增殖,即可從中提取所需要的單克隆抗體。
三、實驗結果：
實驗結果以總細胞孔（如96孔）中出現克隆孔統計出克隆百分率，并可進一步按單細胞孔、雙細胞孔、多細胞孔分別計算。
四、注意事項：
1、注意無菌操作，一旦發現污染（孔）必須及時處理；
2、計數細胞要求準確，稀釋量亦要準確，否則將造成一孔多細胞克隆或克隆百分離太低；
3、在計數克隆出現率之前，不宜更換培養液，也不宜強烈振動培養板；
4、做克隆化培養的小牛血清必須是優質血清；
5、若做克隆抗體檢測時，特別要保護細胞的生長狀況，防止細胞生長不良甚至丟失。