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淺析單細胞鋪板可能會出現的問題

閱讀:934        發布時間:2021-8-26
  單細胞鋪板是克隆篩選的常用方式,其中手動的有限稀釋法更是具備可操作性強,成本相對低廉等優勢,因此受到廣大用戶的青睞,長期用于克隆篩選的過程中。
  手動細胞鋪板可能會出現的問題:
  1、細胞計數前后出現較大誤差?
  考慮細胞沉降導致懸液不勻;懸液體積過大或過小;稀釋倍數太高或太低等原因造成。
  2、如何克服細胞懸液不均勻的問題?
  盡量將細胞吹打為單個,防止抱團,且用移液槍充分吹打,使其均勻懸浮在培養基中。
  3、一般加多少細胞懸液合適?
  由于加入計數室的量,過少會導致計數室內出現氣泡,過多則會使得計數板上的蓋玻片不緊貼計數板,使得高度變高,體積變大;計數室體積為9mm3,所以一般加15ul左右。
  4、計數時,細胞稀釋倍數如何控制?
  若是計數室細胞過稀或過密,會造成較大誤差,一般適濃度為5~10×105細胞/ml。如一般10cm皿的細胞約300-500萬個,一些細胞個體小也能達到1000-2000萬,可根據所需細胞數目取出部分作稀釋或連續稀釋后計數。舉例來說可將100ul細胞懸液加入到900ul培養基中,混勻后進行計數,計數所得乘以10即為實際細胞密度。
  5、計數的原則有哪些?
  計數時對壓在外圈邊線的細胞遵循“計上不計下,計左不計右"的統計學原則,遇到兩個以上的細胞組成的細胞團計為一個細胞。

  因此手動有限稀釋鋪板還是會存在效率低下的問題。

       Namocell單細胞分離儀為單細胞鋪板提供了更好的解決方案。一次性芯片,保證樣本之間*隔離;儀器體積小巧,可置于超凈臺中 高效分選:96孔板分選不到1min,384孔板4min以內,單克隆率超過95%輕松分選:儀器操作簡單,無需操作維護。

        Namocell單細胞鋪板的原理如下:將細胞通過一次性的芯片上端加樣孔,注入到芯片腔體中。單細胞流在微流控通道中流過激光檢測區域,機器能對細胞進行識別,去除掉細胞碎片,死細胞以及狀態較差的細胞,使得終落到孔板中的細胞都具有很好的活性,能夠捕獲每一個活性細胞,形成1ul體積的液滴,輕柔地落進孔板中。整個過程對細胞的損傷可以忽略不計,所以分選得到的細胞絕大多數的細胞都能再次分裂生長。



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