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單克隆培養(yǎng)的原理介紹

閱讀:2929        發(fā)布時(shí)間:2020-7-20
  單克隆培養(yǎng)對(duì)增殖力比較強(qiáng)的細(xì)胞操作起來(lái)的確比較適合,但增殖較慢的細(xì)胞也不是不可以,至于稀釋到每孔只有1~2細(xì)胞,細(xì)胞稀釋的密度要取決你每孔所加的培養(yǎng)液體積,一般說(shuō)來(lái)保證每孔內(nèi)平均細(xì)胞數(shù)為0.5個(gè)即可,稀釋并加入培養(yǎng)孔后,在顯微鏡下觀察,將只有一個(gè)細(xì)胞的孔標(biāo)記出。
  經(jīng)過(guò)抗體測(cè)定的陽(yáng)性孔,可以擴(kuò)大培養(yǎng),進(jìn)行克隆,以得到單個(gè)細(xì)胞的后代分泌單克隆抗體,克隆的時(shí)間一般說(shuō)來(lái)越早越好,因?yàn)樵谶@個(gè)時(shí)期各種雜交瘤細(xì)胞同時(shí)旺盛生長(zhǎng),互相爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)和空間,而產(chǎn)生抗體的細(xì)胞有被淹沒(méi)和淘汰的可能,但克隆時(shí)間也不宜太早,太早細(xì)胞性狀不穩(wěn)定,數(shù)量少也易丟失。克隆化的陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞,經(jīng)過(guò)一段時(shí)期培養(yǎng)之后,也還會(huì)因?yàn)榧?xì)胞突變或特定染色體的丟失,使部分細(xì)胞喪失產(chǎn)生抗體的能力,所以需要再次或多次克隆化培養(yǎng)。
    單克隆培養(yǎng)原理:將細(xì)胞經(jīng)熒光抗體染色后,經(jīng)噴嘴形成單個(gè)細(xì)胞的線形液滴,熒光素發(fā)射熒光,此信號(hào)由光電倍增管接收,再結(jié)合細(xì)胞形態(tài)大小產(chǎn)生光散射信號(hào),經(jīng)電腦處理,產(chǎn)生信號(hào)并與預(yù)定的信號(hào)對(duì)比,根據(jù)細(xì)胞熒光強(qiáng)度及細(xì)胞大小不同,將細(xì)胞分成不同級(jí)別,在電場(chǎng)中發(fā)生偏離,而分別收集于不同容器中。

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