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單細(xì)胞分選方式利弊以及難易程度介紹
閱讀：670 發(fā)布時(shí)間：2020-6-22
單細(xì)胞分選是對(duì)細(xì)胞（或微粒）的物理、生理、生化、免疫、遺傳、分子生物學(xué)性狀及功能狀態(tài)等進(jìn)行定性或定量檢測(cè)的一種現(xiàn)代細(xì)胞分析技術(shù)。
如果對(duì)通量要求較高，同時(shí)目標(biāo)細(xì)胞有適宜的熒光標(biāo)記，可利用流式細(xì)胞儀完成分選。經(jīng)熒光染色或標(biāo)記的單細(xì)胞懸液，被高壓壓入流動(dòng)室內(nèi)，在鞘液的包裹和推動(dòng)下，細(xì)胞被排成單列，以一定速度從流動(dòng)室噴口噴出。通過(guò)相應(yīng)熒光檢測(cè)及充電，獲得目的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞分離。
優(yōu)點(diǎn)：通量較高，可分選單個(gè)細(xì)胞。
缺點(diǎn)：需要具有分選功能的流式細(xì)胞儀，有穩(wěn)定可用的熒光標(biāo)記或熒光染料，需制備一定量的細(xì)胞懸浮液，不適用于微量樣本。
微流控分選基于流體力學(xué)原理實(shí)現(xiàn)細(xì)胞分選，適用于高通量、大規(guī)模的單細(xì)胞研究。近兩年大熱的平臺(tái)就是利用微流控技術(shù)進(jìn)行單個(gè)細(xì)胞分選，其技術(shù)核心是含有75萬(wàn)種油滴包裹的凝膠珠，能在10分鐘內(nèi)自動(dòng)完成多至80,000個(gè)細(xì)胞的捕獲，目前廣泛應(yīng)用于細(xì)胞分群相關(guān)的研究中。
優(yōu)點(diǎn)：分選通量高，成本低，采用商業(yè)化儀器操作簡(jiǎn)便。
缺點(diǎn)：對(duì)細(xì)胞懸浮液活性要求較高（至少＞85%），細(xì)胞總量要求較高，若采用Barcode+UMI擴(kuò)增原理，無(wú)法檢測(cè)全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄本。
利用流式細(xì)胞分選技術(shù)進(jìn)行的單細(xì)胞分選，具有精度高、通量大、分選參數(shù)多，成本相對(duì)低等優(yōu)點(diǎn)。
但要通過(guò)流式分選出足夠多的符合要求的單細(xì)胞進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)并沒(méi)有那么容易。下面三方面是必須要考慮的問(wèn)題：
1、活性
細(xì)胞活性狀態(tài)對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)而言非常重要，就拿轉(zhuǎn)錄組分析為例，高通量表達(dá)譜芯片技術(shù)，需要高質(zhì)量的RNA樣本，細(xì)胞活性不好或死細(xì)胞會(huì)直接導(dǎo)致RNA降解，實(shí)驗(yàn)無(wú)法繼續(xù)。
2、精度
流式分選是精密度高的儀器，稍稍不同的參數(shù)（激光、液流等）的設(shè)置都會(huì)直接造成結(jié)果偏差；另外既然是想研究單細(xì)胞，那么就得確保分選得到的確為單個(gè)細(xì)胞，否則同樣沒(méi)有意義。
3、效率
自動(dòng)化替代人工無(wú)疑是提高效率、節(jié)省成本的有力舉措；當(dāng)你需要單細(xì)胞分選時(shí)，務(wù)必是個(gè)長(zhǎng)時(shí)間工程，鞘液用光時(shí)，其更換繁瑣度、耗時(shí)、連續(xù)性等都是需要考慮的。