您好, 歡迎來到化工儀器網
高產細胞株單克隆篩選時細胞的活性問題
近，單抗市場又迎來了一個關注的熱潮。實驗室的技術人員以及各大設備廠家，也都逐漸把目光和精力都投向了如何提高單抗藥物研發和生產的效率問題上了。在這一層面，各大單抗研發生產企業似乎都在進行賽跑。誰在整個流程中搶先一小步，那么極有可能在整個單抗藥物市場中贏得先機。
在這里，今天我們要討論的是關于在穩定株篩選過程中，如何提高單克隆細胞的活性。大家都想把高產的細胞株順利地挑選出來，然后讓其穩定地生長、增殖。真正做實驗的人員才會發現，其實這整個過程遠遠沒有流程設計時那么簡單。這里會涉及到一下幾個問題：
其一，挑選的方法。目前，實驗室里經常用到的單克隆細胞篩選方法有有限稀釋法，半固體培養基挑選法（例如Clonpix），以及流式細胞術挑選法等。這其中有好多需要關注的點，例如挑選細胞的參數，挑選方法本身對細胞的損傷等。所以說，一個的篩選方法能讓工作效率提高好幾倍。
有限稀釋法是目前常用的一種常規武器，這種方法篩選細胞大的好處就是基本上不會傷害細胞。整個過程中細胞所經歷的，也僅僅是在移液槍頭中的短暫停留，因此幾乎是零損傷。不過，這種方法的弊端也是顯而易見，就是效率問題。首先是鋪板效率，雖然不到一分鐘能將一塊96孔板鋪滿，但是一般來說96孔中有細胞的概率在2/3左右（按照細胞濃度會有所差別），其中單個細胞的概率就更小了。這些細胞要經過一段時間的生長，抗體分泌之后，在其上清液中去檢測抗體含量。流程耗時太長，且效率低下。但是在沒有更先進的設備的時候，這還是目前穩妥的選擇。
半固體培養基挑選法。在半固體的培養基上，以一定的密度“種上”細胞，并且讓細胞生長并分泌抗體。經過一段時間之后，原先細胞的周圍會有抗體產生，然后對整個體系進行熒光抗體染色，并且通過熒光顯微設備檢測到熒光較強的“一團”，將其“挖”出。接著，經過一些特定的處理環節，將細胞置于懸浮培養環境中，讓其生產抗體。這是前幾年較流行的挑選方法，優勢非常明顯，能看到單克隆細胞，又能檢測生產的抗體產量。但是后來很多使用者發現，剛從半固體培養基“挖”出來的細胞，不適合直接培養生產抗體，而是需要在養兩周以上進行“排毒”。因為之前所用的熒光抗體，對細胞還是有一定的毒性。另外，很多用戶發現，由于生長環境的不同，原先在半固體培養基上挑選得到的高產細胞，在后續懸浮的培養環境中并不高產。
流式細胞術挑選法。流式細胞分選儀是挑選細胞的不二法寶，在細胞分析分選當中占有重要一席。在很多抗體研發企業中，也都有用到流式細胞儀來挑選高產細胞株。的確，流式細胞儀在這一應用領域有其*優勢，例如分析（挑選高產細胞），分選快速（每秒上萬個細胞）。不過，很多用戶發現雖然流式在這方面挑選效率很高，但是分下來的細胞活性卻很低。這和流式細胞術的原理有著極大地關系。流式細胞儀在分選過程中，整個內部體系的壓力很大，一般有2~3個大氣壓強，細胞在這樣的環境中容易損傷。高頻震蕩出細小液滴的過程對細胞也是一種傷害。后是1nl左右的液滴高速打到板子中的過程，對細胞是個不小的碰撞。
其二，細胞狀態。挑選的過程對細胞會有所傷害，但是細胞本身的狀態對篩選之后的細胞生長和增殖也是至關重要。細胞在篩選前已經處于活性較差的狀態，在分離成單細胞之后，更不能奢望它能有所改觀。另外，傳代次數越多，一般單細胞在生長的概率越小。所以，有時候我們在尋找或者比較篩選方法的時候，細胞的狀態也需要考慮進去。
其三，培養基的選擇。動物細胞本身都輸“群居”的，單個生長本身就有很大的難度。細胞在生長過程中會分泌很多復雜的生長因子。這些生長因子會促進細胞的生長和增殖，但是單個細胞生長時，這種促進作用幾乎沒有了。很多細胞其實在分離出來的時候，明明有著很好的活性，但是卻偏偏不增殖。這類細胞它會在體積上慢慢變大，長大到一定程度直接就“自爆”了。因此，一個好的condition media,就會成為每家培養單細胞的秘密武器。
Namocell致力于單細胞的分離分選。的微流體單細胞分離技術在抗體研發中有著很好的應用。首先，Namocell單細胞分離儀的內部壓力只有不到2 psi，整個分選過程無需高頻震蕩，保證了細胞活性；其次，用到激光激發和熒光接收的原理，能夠對細胞進行識別和篩選；后，不到1min即可分選一塊96孔板，分選速度快。