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上海吉至生化科技有限公司
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2019-3-13 閱讀(1940)
DAPI，也稱DAPI dihydrochloride，是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，和雙鏈DNA結合后可以產生比DAPI自身強20多倍的熒光。和EB(ethidium bromide)相比，對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。因為DAPI是含有特定AT序列DNA的一種嵌入劑，它能像Hoechst染料一樣粘附在DNA雙螺旋的小溝區。
盡管DAPI不能通過活細胞膜，但卻能穿透擾亂的細胞膜而對核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用來檢測酵母線粒體DNA，葉綠體DNA，病毒DNA，microplasm DNA以及染色體DNA。DAPI-DNA復合物的激發和發射波長分別為360nm和460nm。
DAPI染色常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。DAPI也常用于普通的細胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。
DAPI溶液使用過程
1、用1mLddH2O將DAPI溶解，制得2.9mM的DAPI溶液（1mgDAPI/1mL H2O）。
注：DAPI不能直接用PBS等緩沖溶液溶解，需要先用水將其溶解。
2、取適量DAPI水溶液加到PBS中，制備成10~50µM的DAPI溶液。 推薦以下PBS的配制方法： 將8.00g NaCl、0.20g KCl、2.9g Na2HPO4·12H2O、0.2g KH2PO4溶解于1L純水中。
3、將1/10培養基體積的DAPI溶液加入到細胞培養基中。也可以1/10濃度的DAPI緩沖液代替培養基。
4、在37℃培養細胞10~20分鐘。
5、用PBS或合適的緩沖液洗細胞兩次。
6、用帶有360nm激發波長，460nm發射波長的濾光片的熒光顯微鏡觀察細胞。
注意事項
1、DAPI對人體有一定刺激性，請注意適當防護。
2、熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當天完成檢測。
3、為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。
4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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