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大鼠17-酮類固醇（17-KS）ELISA試劑盒操作步驟和樣本要求
閱讀：141 發(fā)布時(shí)間：2018-11-28| 提 供 商 | 上海邦景實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 15KB |
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【大鼠17-酮類固醇(17-KS)ELISA試劑盒操作步驟】
1、準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔，記錄各孔位置，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL；待測(cè)樣本孔中先加入待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對(duì)照孔不加。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說明書操作洗板）。
6、加酶標(biāo)工作液：每孔加入酶標(biāo)工作液50μL，空白對(duì)照孔不加。
7、溫育：重復(fù)4的操作。
8、洗板：重復(fù)5的操作。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，37℃避光顯色15min。
10、終止：取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)（顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11、測(cè)定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長測(cè)量各孔的吸光值（OD值）。
12、計(jì)算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。zui終濃度為實(shí)際測(cè)定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
【大鼠17-酮類固醇(17-KS)ELISA試劑盒 樣本要求】
1、樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因?yàn)榀B氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。
2、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立即試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、樣本應(yīng)充分離心，不得有溶血及顆粒。