化工儀器網
技術文章
ELISA實驗標準曲線的技術解答
閱讀：420 發布時間：2023-7-3ELISA原理：免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發生的高選擇性高特異性識別和結合原理，對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法，酶聯免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個部分組成：免疫識別，信號輸出和數據處理。標準曲線做的好與壞會直接影響到ELISA實驗的結果，甚至是關系到實驗的成敗。那么在ELISA實驗中，這一方面該如何處理呢？下面對ELISA實驗標準曲線的技術解答內容：
1.設置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內，包括上限和下限。而對于呈S型的標準曲線，盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度*陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內。
2.采用倍比稀釋法配制標準曲線中的標準樣品濃度，這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會出現較大的偏離。
3.樣品的濃度等指標是根據標準曲線計算出來的，所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事，否則后面的實驗結果無從談起。
4.做出的標準曲線相關系數因實驗要求不同而有所變動，但一般來說，相關系數R至少要大于0.98，對于有些實驗，至少要0.99甚至是0.999。
6.檢測標準樣品時，應按濃度遞增順序進行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高準確性。
7.標準曲線的樣品數一般為7個點，但至少要保證有5個點。
繪制標準曲線方法：
標準曲線濃度得到后，可通過計算器、Excell或SPSS統計軟件進行繪制，并得到相關的回歸方程（即計算公式）和相關系數（回歸系數）。Excell軟件比較好用一些；SPSS也行，不過是英文的，初學者不是很容易掌握；計算器嘛太麻煩了，所以現在一般不用。