化工儀器網
技術文章
ATCC細胞基本原理與培養的方法
閱讀：1056 發布時間：2021-1-6ATCC細胞基本原理：
ATCC細胞在體外培養時,受到非特異性有絲分裂原（如PHA、ConA）刺激后,可出現細胞體積增大,代謝旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向**母細胞轉化.**細胞轉化率的高低可以反映機體的細胞**水平,因此可作為測定機體**功能的指標之一.
ATCC細胞轉化試驗有形態計數法、MTT 法和同位素法三種.MTT 法即四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法.MTT 是一種噻唑鹽,化學名3-（4,5-二甲基-2-噻唑）-2,5-二苯基溴化四唑,水溶液為黃橙色.小鼠脾細胞受到ConA 作用后發生增殖活化,其胞內線粒體琥珀酸脫氫酶活性相應升高,MTT 作為其底物參與反應,形成藍色的甲臜（Formazan）顆粒沉積于細胞內或細胞周圍,經鹽酸─異丙醇溶解后為藍色溶液,可用酶標測定儀測定細胞培養物的OD 值,測定波長570nm.根據OD 值的大小計算反應體系中細胞增殖程度.
ATCC細胞培養常規方法：
1. 凍存細胞的復蘇
應遵守慢凍快融的原則。先將水浴鍋調至37-37。5度，取出凍存的細胞迅速放入后將細胞面浸至水面以下不斷搖動至融化。
在無菌臺內將*培養基加入50ml的小培養瓶內，約5ml左右，然后用無菌吸管從凍存管內取出細胞，置培養并內輕輕搖晃，使細胞均勻后置培養箱內培養。
2. 傳代:
對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進行消化，(根據經驗)，晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2-5分鐘，鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后，輕輕振動瓶底使細胞全部脫落，加入2-3ml*培養基后，輕輕吹打，使細胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養瓶內，加入*培養基后繼續培養或實驗。
一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內，加入*培養基繼續培養，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養基，輕輕吹勻后，分置其它培養瓶內加入*培養基繼續培養。
貼壁細胞:
懸浮細胞:
3. 凍存
將貼壁細胞消化后離心收集，懸浮細胞直接離心收集，以*培養基或胎牛血清重懸細胞至終濃度約106/ml。加入10%的DMSO。以每管1～2ml分裝至凍存管中。用絕熱材料包裹置-70攝氏度冰箱冷凍過夜。次日保存到液氮中。