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                     黑化大家鼠肺成纖維細胞；NRm操作流程

已是十一月末。一年又快到頭了。回憶千絲萬縷如煙霧繚繞，即使我用文字頻繁的記錄下生活的種種鏡頭，也握不緊，抓不住它。許多瑣碎和細節，無法用任何形式表達，唯有腐爛成尸骸，消融在遠去的歲月里。接下來介紹   黑化大家鼠肺成纖維細胞；NRm操作流程

冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽長期儲存。

冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。

操作步驟 :

　　1、將長滿細胞的培養瓶中原來的培養液棄去。 　　

2、加入0.5—1ml 0.25%胰酶溶液，使瓶底細胞都浸入溶液中。 　　

3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下觀察細胞。隨著時間的推移，原貼壁的細胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時將胰酶棄去，加入10ml培養液終止消化。 　　觀察消化也可以用肉眼，當見到瓶底發白并出現細針孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約為1—3分鐘。 　　

4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液，分到另外兩到三瓶中，實踐培養液塞好橡皮塞，置37℃下繼續培養。第二天觀察貼壁生長情況。 　　附：消化液配制方法： 　　稱取0.25克胰酶蛋白酶（活力為1：250），加入100ml無Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解，濾器過濾除菌，4℃保存，用前可在37℃下回溫。