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血清不穩(wěn)定原因及解決辦法參考

閱讀:274          發(fā)布時間:2023-3-6

血清,指血液凝固后,在血漿中除去纖維蛋白分離 出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。

血清最大的劣勢就是不穩(wěn)定,不穩(wěn)定原因如下:
1、來源不穩(wěn)定
以胎牛血清為例,懷孕母牛在屠宰前腹部被剖開,取出胎牛,在低溫?zé)o菌條件下,刺破胎牛的心臟以獲取血清。就這一條,動物倫理組織就可以把你攔住嘮嘮。另外,牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家,我國在對牛血清的質(zhì)量《中國生物制品主要原輔料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn) 2000》中提出比較嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)要求,包括蛋白質(zhì)含量,細(xì)菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細(xì)菌內(nèi)毒素,細(xì)胞增殖支持等檢查。

2、組分不穩(wěn)定
還有最讓人鬧心的,動物血清成分復(fù)雜,其組分及含量常和動物性別(公胎牛,母胎牛,如激素)、年齡、生理狀態(tài)、營養(yǎng)條件不同而有差異,是不是覺得特像中藥。還有,盡管血清大部分成分是已知的,但仍然存在不清楚的組分,所以導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)化極其困難。所以,不同的血清差異很大,就是同一的不同批次血清差異也很大。

3、用法不穩(wěn)定
實(shí)驗(yàn)習(xí)慣的不同,都可能導(dǎo)致細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不穩(wěn)定,比如,有人四度過夜融化,有人急性子,直接扔進(jìn)水浴鍋。新手拿到一瓶血清,第一個問題就是問
自己,要不要滅活?血清同時含有內(nèi)毒素、血色素、補(bǔ)體、抗體等其他有害成分,影響細(xì)胞生長甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡,對某些實(shí)驗(yàn)來說,極為重要。

如此的不穩(wěn)定,該怎么在實(shí)驗(yàn)過程中盡可能的解決呢?
1、土豪和有得選擇的實(shí)驗(yàn)室,請選擇無血清培養(yǎng)基。
2、不要頻繁更換血清牌子,不同血清來源,工藝,包裝運(yùn)輸?shù)榷加泻艽蟛町?,盡量不要更換牌子。
3、選定品牌后,對于經(jīng)過測試過的好用的血清,同一個批次多囤積一些,計算本次實(shí)驗(yàn)的大概用量,然后在多加20%的儲備,放在-20-80度保存。
4、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)建議每個人用自己的培養(yǎng)基,PBS,胰酶等試劑以及用具,保持實(shí)驗(yàn)條件一致性,避免交叉污染,別給自己添堵,也別給別人添堵。
5、如果實(shí)在要更換血清,先將細(xì)胞在新的血清里傳兩到三代,適應(yīng)新的條件后,細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

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