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技術(shù)文章

細胞培養(yǎng)基本操作過程

閱讀:439          發(fā)布時間:2023-1-5

   細胞培養(yǎng)技術(shù)指的是細胞在體外條件下的生長,在培養(yǎng)的過程中細胞不再形成組織(動物)。培養(yǎng)物是單個細胞或細胞群。細胞在培養(yǎng)時都要生活在人工環(huán)境中,由于環(huán)境的改變,細胞的移動或受一些其他因素的影響,培養(yǎng)時間加長,傳代導(dǎo)致細胞出現(xiàn)單一化型。

細胞培養(yǎng)基本操作過程以下幾點:

1.準備工作:準備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒,培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌,無菌室或超凈臺的清潔與消毒,培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試。

2.取材:在無菌環(huán)境下從機體取出某種組織細胞(視實驗?zāi)康亩?,經(jīng)過一定的處理(如消化分散細胞、分離等)后接入培養(yǎng)器皿中,這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養(yǎng)則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的首ci 培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。

3.培養(yǎng):將取得的組織細胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過程稱為培養(yǎng)。如系組織塊培養(yǎng),則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部,幾個小時后組織塊可貼牢在底部,再加入培養(yǎng)基。

4.凍存及復(fù)蘇:為了保存細胞,特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株,要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度-196℃,將細胞收集至凍存管中加入含保護劑(一般為二甲亞砜或甘油)的培養(yǎng)基,以一定的冷卻速度凍存,最終保存于液氮中。在極低的溫度下,細胞保存的時間幾乎是無限的。復(fù)蘇一般采用快融方法,即從液氮中取出凍存管后,立即放入37℃水中,使之在一分鐘內(nèi)迅速融解。然后將細胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進行培養(yǎng)。



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