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技術(shù)文章

細胞凍存的注意事項

閱讀:372          發(fā)布時間:2022-3-15
細胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過程中,在培養(yǎng)器具、培養(yǎng)液及各種準備工作方面都需大量的耗費,而且細胞一旦離開活體開始原代培養(yǎng),它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時進行細胞凍存十分必要。細胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久; 細胞儲存在液氮中,溫度達-196℃,理論上儲存時間是無限的。
關(guān)于細胞凍存的注意事項:
1.  為保持細胞最大存活率,一般都采用慢凍存融的方法。
2.  凍存物距液氮面越近溫度越低。標準的低凍速度為-1℃~12℃/ 分鐘,當溫度下降達-25℃時,下降速度可增至-5~-10℃/ 分鐘,到-100℃時則可迅速凍入液氮中。因此要適當掌握凍存物下降入液氮中的速度,過快能影響細胞內(nèi)水分透出,太慢則促冰晶形成。
3.  初次凍存者在下降凍存時,宜先用細木棒伸入罐中探測液面位置,然后需用溫度計與凍存物并行的辦法,以觀測下降凍存物的速度、凍存物與液氮液面距離和溫度三者關(guān)系,當已掌握以上各參數(shù)和凍存技術(shù)熟練后,僅按下降時間和下降距離便可獲理想凍存效果。
4.  各種細胞對凍存速度的要求也不一樣;上皮細胞和成纖維細胞耐受性可能大些,骨髓干細胞-2~-3℃/ 分鐘合適;胚胎細胞耐受性較小,不宜太快??傊谝婚_始時,下降速度不能超過-10℃/ 分鐘。
5.  用什么防護劑合適和用量多大,要依細胞而定,初代培養(yǎng)細胞用 DMSO 較好,一般細胞可用甘油;用量以較小為好。有人認為人皮膚上皮細胞貯存在 20%-30% 甘油中很好。
6.  原則上細胞在液氮中可貯存多年,但為妥善起見,凍存一年后,應再復蘇培養(yǎng)一次,然后再繼續(xù)凍存。
7. 將凍存管放入液氮容器或從中取出時,要做好防護工作,以免凍傷。
8. 注意自身的安全,對于來自人源性或病毒感染的細胞株應特別小心。操作過程中,應避免引起氣溶膠的產(chǎn)生,小心有毒性試劑例如 DMSO,并避免尖銳物品傷人等。


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