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技術文章

大鼠ELISA試劑盒分類注意事項

閱讀:156          發布時間:2021-2-8

原理

 本試劑盒系由預包被豬瘟病毒重組E2蛋白的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成,應用酶聯免疫法(ELISA)原理檢測豬血清、血漿樣本中豬瘟病毒抗體。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本,經溫育后若樣品中含有豬瘟病毒抗體,則將與酶標板上抗原結合,經洗滌除去未結合的其他成分后;再加入酶標記物,與酶標板上抗原抗體復合物發生特異性結合;再經洗滌除去未結合的酶標記物,在孔中加TMB底物液,與酶反應形成藍色產物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關;加入終止液終止反應后,產物變為黃色;用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值,即可知樣品是否含有豬瘟病毒抗體。

操作步驟

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復至室溫。

2.取所需用量酶標板條,設空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。

3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl;陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

4.混勻,置37℃反應30分鐘。

5.扣去孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,重復洗滌5次,拍干。

6.每孔加酶標記物100μl(空白孔除外)。置37℃反應30分鐘。

7.洗滌,同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,37℃避光反應10分鐘。

9.每孔加終止液50μl,混勻,用空白孔調零,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A值)。

注意事項

1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣,嚴格健全和執行消毒隔離制度,各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性,應避免接觸皮膚和衣物,如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

3.酶標板從冷藏環境中取出時應恢復至室溫方可開袋,未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶,使用時需恢復至室溫以*溶解。

5.洗滌時各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測的樣品應保持新鮮。

7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。

8.不同批號試劑組分不得混用。

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