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人ELISA試劑盒原理與操作程序

閱讀:474          發(fā)布時間:2021-1-6

人ELISA試劑盒原理:

    采用競爭法測定金黃地鼠氧化低密度脂蛋白OXLDL水平。用金黃地鼠氧化低密度脂蛋白OXLDL抗原包被微孔板,制成固相載體,實驗時依次在微孔板中加入標本及標準品,并加入HRP標記的OXLDL抗體,標本及標準品中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合。反復洗滌后加底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化為藍色,再用硫酸終止反應,轉變成黃色。標本中抗體量越多,結合在固相上的酶標抗體愈少,顏色越淺。顏色的深淺和樣品中的OXLDL含量呈負相關。采用酶標儀在450nm波長測定吸光度(OD值),根據(jù)標準曲線,計算測試樣品中OXLDL濃度。

人ELISA試劑盒操作程序:

    1. 棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復5次,拍干。

    2. 每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。。

    3. 取出酶標板,每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

    4.測定:以空白孔調零,在450nm波長下測量各孔的吸光度值(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

    5.根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了的,其實際濃度應該乘以總稀釋倍數(shù)。

人ELISA試劑盒技術特點:

1準確可靠,臨床雙盲對照試驗>1000例,結果與金標準測序法比對,結果*性大于99%。

2高靈敏:可檢測低至10ng的人基因組DNA。

3快速:整個檢測流程只需3小時。

4簡便:試劑盒提供預混好的試劑,使體系配置操作簡便。

5防污染

6高特異性:雙重特異性組成,保證檢測結果的特異性和準確性引物與DNA互補鏈結合必需*配對,才能延伸。探針特異性與所檢測基因的PCR產(chǎn)物配對,在延伸中產(chǎn)生熒光。

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