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影響elisa試劑盒檢測的原因有哪些

閱讀:292          發布時間:2020-6-10

ELISA試劑盒 即酶聯免疫吸附試驗,是一種常用的固相酶免疫測定方法。由于ELISA方法靈敏,特

異性強不需要特殊設備,所以被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。

一:標本的影響

溶血標本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易產生假陽性。可能是溶血血清中含有過氧化酶物

質(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),ELISA試劑盒在洗滌過程中往往難以*洗脫,它可使

H2O2釋放出原生態氧(O),從而催化底物四甲基聯苯胺生成可溶性的有色物質,即顯藍色,產

生假陽性[2]。所以嚴重溶血標本禁用。標本受細菌污染。因菌體中可能含有內源性辣根過氧化

物酶,因此,被細菌污染的標本同溶血標本一樣,亦可產生非特異性顯色而干擾測定結果。

二:標本保存不當

在冰箱中保存過久的標本,在間接法ELISA測定中會導致本底過深、造成假陽性;為克服上述干

擾,ELISA試劑盒測定的血清標本宜為新鮮采集;如不能立即測定,5 d內測定的血清標本可存放于

4℃,1周后測定的血清標本應低溫凍存;凍存后融解的標本,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分

混合后再測定,但混勻時應輕柔,不可強烈振蕩。塑料試管能吸附抗原物質,樣本久置在塑料管內

會使樣本內抗原含量下降造成假陰性。使用真空采血管;并使用非抗凝標本,肝素抗凝血漿會增加

OD值,EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA系統中辣根過氧化物酶活性。

三:標本凝固不全

在工作中,有時為了爭取時間快速檢測,ELISA試劑盒常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血

清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造

成假陽性結果;因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。

 

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