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小鼠靜脈注射操作步驟如下：
1. 首先要固定小鼠，簡單的固定方法就是把小鼠放在盒子里面，讓它的尾巴伸在盒蓋的外面，用手抓住小鼠尾巴，輕輕往外拽，就可以固定好小鼠了。
這種固定方法，小鼠可以在盒子里面活動，固定的也不是很牢固，但是只要你尾靜脈注射的手法很熟練，就足以用來注射了。
還有的固定方法就是用一個小的圓筒，是金屬做的，（可以在當地的鐵匠鋪，或者買白鐵鋪里面定做）首先是金屬比較結實，而且可以用來固定在鐵架臺上，方便操作。圓筒的一段有個蓋子可以拿下來，蓋子中間有個小孔，可以讓小鼠的尾巴伸出來（中間的小孔可以用膠布纏一下，防止銳利的邊緣割傷小鼠尾巴）。
另外一段可以用金屬網的結構，網的形狀可以做成頭的頭端形狀。網狀結構可以讓光線透近來，方便小鼠鉆進圓筒里面。圓筒的長度約10cm，直徑約 3～4cm，可以做個系列長度和直徑的圓筒，適合不同大小的小鼠。
2. 固定好小鼠后就是注射了，一般用一次性的1ml的注射器就可以了，玻璃 的1ml的注射器也可以用，針頭用4號的就可以了。
3. 注射前首先要讓小鼠的血管充盈。可以采用75%的酒精棉球擦拭的方法或者采用溫水浸泡的方法。若小鼠的血管很不清楚，推薦采用溫水浸泡的方法，水溫以不燙手為宜。
溫水浸泡2～3分鐘后，取出小鼠尾巴，用干棉球擦拭。等一會兒，待血管充盈后，酒精棉球擦拭后就可以進針了。若血管還不充盈，可以反復用溫水浸泡，切不可冒險注射，除非你手法很熟練，另當別論。
4. 小鼠尾部共有四條血管，一般認為左右的兩條靜脈比較容易注射，多采用這兩條靜脈進針。一般要求進針部位靠近小鼠的尾端，這樣若注射失敗的話，還可以再向上選擇進針點。
但是進針部位也不可以太靠下，因為越往下，靜脈越細，操作越難，一般以小鼠尾巴下三分的位置比較好。
5. 關鍵的就是進針了。進針時操作者左手食指和拇指固定住小鼠的尾巴，讓小鼠的尾巴在經過拇指后向下彎曲，進針點靠近拇指指甲。
針頭和血管呈約30°角，針尖斜面朝上，輕輕挑刺入皮膚后針頭立即和血管平行，一般情況下一次就可以進入血管，可以將針頭刺入血管一大半，左右輕輕晃動針頭，確定針頭在血管內，就可以推注藥液了，正常情況下，推注的過程應該沒有明顯阻力，血管也不會鼓起。
推液時動作宜輕柔，若發現血管鼓起，那是針頭沒有刺入血管，需立即拔出針頭。