成人做爰免费视频免费看_成人a级高清视频在线观看,成人a大片在线观看,成人a大片高清在线观看,成人av在线播放,一a一级片,一级黄 中国色 片,一级黄 色蝶 片,一级黄色 片生活片

產品展廳收藏該商鋪

您好 登錄 注冊

當前位置:
上海撫生實業有限公司>技術文章>Taq酶在聚合酶鏈式反應細節

技術文章

Taq酶在聚合酶鏈式反應細節

閱讀:1367          發布時間:2019-3-29

1976年Chien分離出熱穩定聚合酶,1986年Erlich分離并純化了適于聚合酶鏈式反應的Tq熱穩定性聚合酶,為聚合酶鏈式反應成為實用技術奠定了基礎,現已用基因重組。日前可用于聚合酶鏈式反應的聚合酶有多種:有從水生棲熱菌中提取的Taq酶、從嗜熱棲熱苗中獲得的Taq酶、從Litoralis棲熱球菌中分離的VENT酶、及從酸熱浴硫化裂片苗中分離的Sac酶,而以Taq酶用得廣泛。Taq DNA聚合酶分子量為94kD,75℃時酶比活性為150bs/酶分子,反應溫度過高或過低均影響其延伸率,Taq蕾有很高的耐熱穩定性。豬elisa試劑盒實驗表明,在92.5℃、95℃、97.5℃時,其半衰期分別為40min、30min和5min。

純化的Taq酶在體外無3'-5'外切酶活性,因而無校正閱讀功能,在擴增過程可引起錯配。錯配堿基的數量受溫度、Mg2+濃度和循環次數的影響。通常,30次循環Taq酶的錯配率約為0.25%,高于Klenow酶的錯配率。Taq酶在每一次循環中產生的移碼突變率為1/30000,堿基替換率為1/8000。應用低濃度的dNTP(各20μmol/L)、1.5mmol/L的Mg2+濃度、高于55℃的復性溫度,可提高Taq酶的忠實性,此時的平均錯配率僅為5x10^-6次/(核苷酸*循環)。

Taq酶具有類似于末端轉移酶的TdT的活性,可在新生成的雙鏈產物的3'端加上—個堿基,尤其是dATP容易加上。因此,欲將聚合酶鏈式反應產物克隆到載體上,可以用兩種處理辦法:一是構建dT-載體;二是用Klenow酶將3'端的A去掉,即在聚合酶鏈式反應反應后,先在99℃加熱10min滅活Taq酶,調整Mg2+濃度至5-10mmol/L,加入1-2U Klenow片段,室溫下作用15-20min,3'端的A即被切去,

以往用Taq酶進行聚合酶鏈式反應擴增,一般只能擴增小于400bp的DNA片段,經過對酶的結構與功能的改造,以及聚合酶鏈式反應方法學的改進,現已能擴增20kb以上的DNA分于。

Taq酶在聚合酶鏈式反應反應中加入的量也很重要,太少當然不好,太多一方面浪費,同時也導致非特異性擴增,通常每lOOμl反應液中含1-2.5U Taq酶為好。在0.5-5U范圍內確定佳酶濃度。另一個問題是,雖然Taq酶是熱穩定性較好的工具酶,也應注意在-20℃貯存。

收藏該商鋪

登錄 后再收藏

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~

對比框

產品對比 產品對比 聯系電話 二維碼 意見反饋 在線交流

掃一掃訪問手機商鋪
021-52961052
在線留言
主站蜘蛛池模板: brazzers Free HD XXXX Pro| 欧美在线日韩精品| 欧美色综合网站在线看| 亚洲欧美日本国产高清| 国产亚洲av综合人人澡| 国产网曝门亚洲综合在线| 欧美性猛交XXXX免费视频软件| 亚洲欧洲国产视频一区二区| 欧美在线精品永久免费播放| 老师你的兔子好软水好多动| 久久久国产中文字幕| 男妓跪趴把舌头伸进我的嘴巴| 老师的双乳好大下面水好多视频| 久久久久久亚洲成人| 日韩一区二区三区免费视频| 久久九九热精品| 嗯了别进插深点用力骂骚| 亚洲欧美自拍色综合图| 机长脔到她哭H粗话H动漫| 日韩欧美一级片大全| 高潮久久久久久久久久久| 日本韩无码电影| 啊老师用力小雪好棒| 国产精品成人AAAA网站女吊丝| 怡春院国产精品视频| 亚洲欧美国产∧v精品综合网| 天天躁人人躁人人躁狂躁| 国产三级精品久久久久| 国产精品一区在线麻豆| 亚洲欧美一区在线播放| 亚洲精品久久国产高清小说| 国产视频观看在线| 国精一区二区AV在线观看网站| 色中色成人社区| 在线观看欧美精品一区| 91黄色在线观看| 国产欧美另类久久久精品免费| 欧美精品国产第一区二区三区| 亚洲AV鲁丝一区二区三区| 五月婷婷欧美| 少妇久久久久久久久|