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技術(shù)文章

大鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)測定具體步驟:

閱讀:343          發(fā)布時(shí)間:2018-8-20

大鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)測定具體步驟:
1.確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目,并增加 1 孔作為 TMB 空白顯色孔。 總數(shù)=樣品數(shù)+9;做雙份檢測時(shí)×2。其余重包裝好放如冰箱中。 
2.將標(biāo)準(zhǔn)品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中,1 孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對于血清、體液、 組織勻漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清,直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品 100μ ι 。 
3.酶標(biāo)板加上蓋,37℃反應(yīng) 90 分鐘。 
4.反應(yīng)后用自動(dòng)洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體;或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體,再對著吸水紙拍幾下。 不洗。 
5.將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔 0.1ml 依次加入。(TMB 空白顯色孔除 外)。37℃反應(yīng) 60 分鐘。 
6. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 3 次,每次浸泡 1 分鐘左右。 
7.將準(zhǔn)備好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入(TMB 空白顯色孔除外)。37℃反應(yīng) 30 分鐘。 
8. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 5 次,每次浸泡 1-2 分鐘左右。 
9.按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分鐘的 TMB 顯色液,37℃避光反應(yīng) 20-25 分鐘 (注意:顯色時(shí)間供參考,因用戶實(shí)驗(yàn)室條件差異,顯色時(shí)間會(huì)有所不同。此時(shí)肉眼可 見標(biāo)準(zhǔn)品的前 3-4 孔有明顯的梯度藍(lán)色,后 3-4 孔差別不明顯)。 
10.按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 終止液,此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。 
11.用酶標(biāo)儀在 450nm 測定 OD值。
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