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細胞屬性：

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠神經少突膠質采用消化、混合細胞營養缺失培養、搖床振蕩結合差速貼壁法并通過專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠神經少突膠質經GC（Galactocerebroside）免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

細胞簡介：

大鼠神經少突膠質細胞分離自腦皮層組織；大腦分左右兩個半球，大腦皮質（灰質）覆蓋著每個大腦半球的大部分，它是神經元胞體集中的地方。內部則是由神經纖維或髓鞘構成的白質。每一個半球都有三個面，即外側面（約占整個皮質面積的1/3）、內側面和底面（占2/3的面積）；半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積；大腦外側面重要的溝、裂有大腦外側裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔，使大腦皮質組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。少突膠質細胞分布于中樞神經系統，在銀浸染標本中，少突膠質細胞比星狀膠質細胞小，其突起也較小而少，呈珠狀，故被稱為少突膠質細胞或寡突膠質細胞。但是用特異性免疫細胞化學染色顯示的少突膠質細胞，其突起并不少，而且還有許多分支。少突膠質細胞的主要功能是在中樞神經系統中包繞軸突、形成絕緣的髓鞘結構、協助生物電信號的跳躍式高效傳遞并維持和保護神經元的正常功能。其異常不僅會導致中樞神經系統脫髓鞘病變，還會引起神經元損傷或精神類疾病，甚至可以引發腦腫瘤。根據少突膠質細胞的分布和位置可分為三種：①束間少突膠質細胞（interfasicular-oligodendrocyte），分布在中樞神經系統的白質的神經纖維束之間；②神經細胞周少突膠質細胞（perineuronal-oligodendrocyte），分布在中樞神經系統的灰質區，常位于神經細胞周圍，與神經細胞的關系密切，故又稱為神經細胞周衛星細胞（perineuronal-satellite-cell），但在神經細胞胞體與此類細胞之間亦常有星形膠質細胞的薄片狀突起分隔；③血管周少突膠質細胞（pcrivascular-oligodendrocyte），主要分布在中樞神經系統內的血管周圍。少突膠質細胞形成的髓鞘膜是最為特化和復雜動物細胞膜之一，其上有眾多跨膜蛋白和表面蛋白用以維持髓鞘的致密穩定結構。如半乳糖腦苷脂（GC），它是髓鞘的一種主要類脂，用GC抗體鑒別成熟的少突膠質細胞是一種比較早的免疫鑒定方法。近十年來，神經發育學科進展較快，更多的少突膠質細胞分子標記物被鑒定出來，如PDGFRa、Mbp、CNP、SOX-10。

培養信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養基 含B-27 Supplement、PDGF-AA、bFGF、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形、多角形

傳代特性 不增殖；不傳代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞培養方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

公司產品：

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。

6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。

11. 鏡檢觀察。