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細胞屬性：

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠三叉神經星形膠質采用消化法結合差速貼壁法篩選制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠三叉神經星形膠質經GFAP免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

細胞簡介：

大鼠三叉神經星形膠質細胞分離自三叉神經組織；三叉神經為最粗大的混合性腦神經，含一般軀體感覺和特殊內臟運動兩種纖維。其特殊內臟運動纖維起于腦橋中段的三叉神經運動核，纖維組成三叉神經運動根，由腦橋基底部與腦橋臂交界處出腦，位于感覺根下內側，最后進入三叉神經第3支下頜神經中，經卵圓孔出顱，隨下頜神經分支分布于咀嚼肌等。運動根內還含有三叉神經中腦核有關的纖維，主要傳導咀嚼肌的本體感覺。三叉神經內以軀體感覺神經纖維為主，這些纖維的細胞體位于三叉神經節（半月節）內，該神經節位于顱中窩顴骨巖部的前面三叉神經壓跡處，為硬腦膜形成的美克爾腔包裹。神經膠質細胞是神經組織中除神經元以外的另一大類細胞，也有突起，但無樹突和軸突之分，廣泛分布于中樞和周圍神經系統。在哺乳類動物中，神經膠質細胞與神經元的細胞數量比例約為10：1。在中樞神經系統（CNS）中的神經膠質細胞主要有星形膠質細胞、少突膠質細胞（與前者合稱為大膠質細胞）和小膠質細胞等。傳統認為膠質細胞屬于結締組織，其作用僅是連接和支持各種神經成分，其實神經膠質還起著分配營養物質、參與修復和吞噬的作用，在形態、化學特征和胚胎起源上都不同于普通結締組織。星形膠質前體細胞主要表達Vimentin，而成熟之后表達Vimentin和膠質纖維酸性蛋白（GFAP），故GFAP被認為是星形膠質細胞成熟的標志物。

培養信息：

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形、多角形

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞培養方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

公司產品：

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。

6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。

11. 鏡檢觀察。