化工儀器網
詳細介紹
本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介：
實驗室分離的人肺微血管內皮細胞采用組織貼塊法并結合內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
實驗室分離的人肺微血管內皮細胞經CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
| 產品名稱 | 人肺微血管內皮原代細胞 | 組織來源 | 肺組織 |
| 英文名稱 | Human Pulmonary Microvascular Endothelial Cells | 貨號 | YS-01X6993 |
| 產品規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
人肺微血管內皮細胞分離自肺組織；肺是機體的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆蓋于心之上。肺有分葉，左二右三，共五葉。肺經肺系(指氣管、支氣管等)與喉、鼻相連，故稱喉為肺之門戶，鼻為肺之外竅。微血管內皮細胞密切參與包括再生、發育、傷口愈合等一系列生理及炎癥反應。細胞呈梭形或多角形，形成單層后呈鵝卵石樣或鋪路石樣排列。肺微血管內皮細胞構成半選擇性屏障，該屏障對于肺氣體交換，調節液體和可溶物在血液與肺間質之間的流動具有重要意義。
培養信息：
包被條件PLL（0.1mg/ml）或明膠（0.1%）
培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率每2-3天換液一次
生長特性貼壁
細胞形態內皮細胞樣
傳代特性可傳2-3代
消化液0.25%
細胞培養方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
公司產品：
| 雞氣管上皮原代細胞 | Cyto-roGFP |
| 人小氣道上皮原代細胞 | DB3.1 大腸桿菌 |
| 小鼠肺大動脈平滑肌原代細胞 | Dekkera naardenensis |
| 大鼠肺大動脈平滑肌原代細胞 | DH10Bac大腸桿菌 |
| 兔肺動脈成纖維原代細胞 | DH10B大腸桿菌 |
| 雞骨骼肌原代細胞 | DH5α（含 pEGFP-N3粒）大腸桿菌 |
| 人肺成纖維原代細胞 | DH5α（含 pTrc99a質粒）大腸桿菌 |
| 小鼠肺大動脈內皮原代細胞 | DH5α（含 pTRE3G質粒）大腸桿菌 |
| 大鼠肺大動脈內皮原代細胞 | DH5α（含 pUCGm質粒）大腸桿菌 |
| 兔肺泡巨噬原代細胞 | DH5α（含L4440載體）大腸桿菌 |
| 雞外周血單核原代細胞 | DH5α（含pACYC177質粒）大腸桿菌 |
| 人支氣管平滑肌原代細胞 | DH5α（含pACYC184質粒）大腸桿菌 |
| 小鼠肺動脈成纖維原代細胞 | DH5α（含pAN7-1質粒）大腸桿菌 |
| 大鼠肺動脈成纖維原代細胞 | DH5α（含pBARGPE1質粒）大腸桿菌 |
| 兔腹腔巨噬原代細胞 | DH5α（含pBiT1.1-N [TK-LgBiT]質粒）大腸桿菌 |
| 人小氣道平滑肌原代細胞 | DH5α（含pBiT2.1-N [TK-SmBiT]]質粒）大腸桿菌 |
| 小鼠肺大靜脈內皮原代細胞 | DH5α（含pBR322質粒）大腸桿菌 |
| 大鼠肺大靜脈內皮原代細胞 | DH5α（含pCBASceI質粒）大腸桿菌 |
| 兔骨骼肌原代細胞 | DH5α（含pcDNA3(1087)質粒）大腸桿菌 |
| 人氣管平滑肌原代細胞 | 人肺微血管內皮原代細胞DH5α（含pcDNA3（1093）質粒）大腸桿菌 |
| 兔骨內膜間充質干原代細胞 | DH5α（含pcDNA3.1(+)CircRNA Mini Vector質粒）大腸桿菌 |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
化工儀器網