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本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介：
實驗室分離的人肺微血管內(nèi)皮細胞采用組織貼塊法并結(jié)合內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
實驗室分離的人肺微血管內(nèi)皮細胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
| 產(chǎn)品名稱 | 人肺微血管內(nèi)皮原代細胞 | 組織來源 | 肺組織 |
| 英文名稱 | Human Pulmonary Microvascular Endothelial Cells | 貨號 | YS-01X6993 |
| 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
人肺微血管內(nèi)皮細胞分離自肺組織；肺是機體的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆蓋于心之上。肺有分葉，左二右三，共五葉。肺經(jīng)肺系(指氣管、支氣管等)與喉、鼻相連，故稱喉為肺之門戶，鼻為肺之外竅。微血管內(nèi)皮細胞密切參與包括再生、發(fā)育、傷口愈合等一系列生理及炎癥反應(yīng)。細胞呈梭形或多角形，形成單層后呈鵝卵石樣或鋪路石樣排列。肺微血管內(nèi)皮細胞構(gòu)成半選擇性屏障，該屏障對于肺氣體交換，調(diào)節(jié)液體和可溶物在血液與肺間質(zhì)之間的流動具有重要意義。
培養(yǎng)信息：
包被條件PLL（0.1mg/ml）或明膠（0.1%）
培養(yǎng)基含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率每2-3天換液一次
生長特性貼壁
細胞形態(tài)內(nèi)皮細胞樣
傳代特性可傳2-3代
消化液0.25%
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
| 雞氣管上皮原代細胞 | Cyto-roGFP |
| 人小氣道上皮原代細胞 | DB3.1 大腸桿菌 |
| 小鼠肺大動脈平滑肌原代細胞 | Dekkera naardenensis |
| 大鼠肺大動脈平滑肌原代細胞 | DH10Bac大腸桿菌 |
| 兔肺動脈成纖維原代細胞 | DH10B大腸桿菌 |
| 雞骨骼肌原代細胞 | DH5α（含 pEGFP-N3粒）大腸桿菌 |
| 人肺成纖維原代細胞 | DH5α（含 pTrc99a質(zhì)粒）大腸桿菌 |
| 小鼠肺大動脈內(nèi)皮原代細胞 | DH5α（含 pTRE3G質(zhì)粒）大腸桿菌 |
| 大鼠肺大動脈內(nèi)皮原代細胞 | DH5α（含 pUCGm質(zhì)粒）大腸桿菌 |
| 兔肺泡巨噬原代細胞 | DH5α（含L4440載體）大腸桿菌 |
| 雞外周血單核原代細胞 | DH5α（含pACYC177質(zhì)粒）大腸桿菌 |
| 人支氣管平滑肌原代細胞 | DH5α（含pACYC184質(zhì)粒）大腸桿菌 |
| 小鼠肺動脈成纖維原代細胞 | DH5α（含pAN7-1質(zhì)粒）大腸桿菌 |
| 大鼠肺動脈成纖維原代細胞 | DH5α（含pBARGPE1質(zhì)粒）大腸桿菌 |
| 兔腹腔巨噬原代細胞 | DH5α（含pBiT1.1-N [TK-LgBiT]質(zhì)粒）大腸桿菌 |
| 人小氣道平滑肌原代細胞 | DH5α（含pBiT2.1-N [TK-SmBiT]]質(zhì)粒）大腸桿菌 |
| 小鼠肺大靜脈內(nèi)皮原代細胞 | DH5α（含pBR322質(zhì)粒）大腸桿菌 |
| 大鼠肺大靜脈內(nèi)皮原代細胞 | DH5α（含pCBASceI質(zhì)粒）大腸桿菌 |
| 兔骨骼肌原代細胞 | DH5α（含pcDNA3(1087)質(zhì)粒）大腸桿菌 |
| 人氣管平滑肌原代細胞 | 人肺微血管內(nèi)皮原代細胞DH5α（含pcDNA3（1093）質(zhì)粒）大腸桿菌 |
| 兔骨內(nèi)膜間充質(zhì)干原代細胞 | DH5α（含pcDNA3.1(+)CircRNA Mini Vector質(zhì)粒）大腸桿菌 |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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