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CRP/PTX1 馬C反應(yīng)蛋白酶聯(lián)免疫試劑盒說明書

閱讀:106          發(fā)布時(shí)間:2022-9-23
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                    CRP/PTX1 馬C反應(yīng)蛋白酶聯(lián)免疫試劑盒說明書


實(shí)驗(yàn)原理:


試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中17-OHP 表達(dá)。用純化的17-OHP 抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中17-OHP 相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的17-OHP 抗體結(jié)合,形成抗體 抗原 酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),與 CUTOFF 值相比較,從而判定標(biāo)本中17-OHP 的存在與否。


樣本要求:


1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融


2.不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作程序:



  CRP/PTX1 馬C反應(yīng)蛋白酶聯(lián)免疫試劑盒操作步驟:


1. 編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)


2. 加樣:分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照 50%l。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液 40%l,然后再加待測(cè)樣品 10%l。加樣將樣品加 于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,


3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。


4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用


5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復(fù) 5 次,拍干。


6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50%l,空白孔除外。


7. 溫育:操作同 3。


8. 洗滌:操作同 5。


9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50%l,再加入顯色劑 B50%l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘.

10. 終止:每孔加終止液 50%l,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。


11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。


  CRP/PTX1 馬C反應(yīng)蛋白酶聯(lián)免疫試劑盒注意事項(xiàng):


1. 操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,本試劑不同批號(hào)組分不得混用。


2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 1530 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未


用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。


3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。


4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。


5.底物請(qǐng)避光保存。


6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),參考波長(zhǎng)為 630nm


7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸,使用時(shí)必須注意安全。


  CRP/PTX1 馬C反應(yīng)蛋白酶聯(lián)免疫試劑盒保存條件及有效期:


1. 試劑盒保存:;28℃。


2.有效期:6 個(gè)月


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