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17-OHP馬17羥孕酮酶聯免疫試劑盒說明書

閱讀:129          發布時間:2022-9-9
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                 17-OHP馬17羥孕酮酶聯免疫試劑盒說明書


實驗原理:


試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中17-OHP 表達。用純化的17-OHP 抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中17-OHP 相結合,經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與 HRP 標記的17-OHP 抗體結合,形成抗體 抗原 酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),與 CUTOFF 值相比較,從而判定標本中17-OHP 的存在與否。


樣本要求:


1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于20℃保存,但應避免反復凍融


2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作程序:



操作步驟:


1. 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)


2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50%l。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40%l,然后再加待測樣品 10%l。加樣將樣品加 于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,


3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。


4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用


5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復 5 次,拍干。


6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50%l,空白孔除外。


7. 溫育:操作同 3。


8. 洗滌:操作同 5。


9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50%l,再加入顯色劑 B50%l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘.

10. 終止:每孔加終止液 50%l,終止反應(此時藍色立轉黃色)。


11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行。


注意事項:


1. 操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。


2.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 1530 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未


用完,板條應裝入密封袋中保存。


3.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。


4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。


5.底物請避光保存。


6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為 630nm


7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸,使用時必須注意安全。


保存條件及有效期:


1. 試劑盒保存:;28℃。


2.有效期:6 個月


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