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鴨細小病毒抗體（PV-Ab）ELISA試劑盒操作步驟
閱讀：394 發布時間：2019-4-291.編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1
孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50µl。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液40µl，然后再加待測樣品10µl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不
觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此
重復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50µl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止
液后15分鐘以內進行。
計算和結果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00;陰性對照平均值≤0.10
臨界值（CUTOFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品OD值<臨界值（CUTOFF）者為鴨細小病毒抗體（PV-Ab）陰性
陽性判定：樣品OD值≥臨界值（CUTOFF）者為鴨細小病毒抗體（PV-Ab）陽性