蛋白激酶D1(PKD1)重組蛋白的相關(guān)產(chǎn)品：τ-蛋白激酶1(tPK1)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達(dá) 性狀：凍干粉 蛋白激酶D2(PKD2)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達(dá) 性狀：凍干粉 γ-分泌激活蛋白(gSAP)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達(dá) 性狀

僅供科研實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品屬性：

英文名稱：Recombinant Protein Kinase D1 (PKD1)

PRKD1; PRK-D1; PKC-MU; PKCM; PK-D1; PRKCM; Protein Kinase C,Mu

酶與激酶 代謝通路 發(fā)育科學(xué)

物種：Homo sapiens (Human，人)

來源：原核表達(dá)

宿主E.coli

內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定)

亞細(xì)胞定位：：Cytoplasm. Cell membrane. Golgi apparatus, trans-Golgi network.

預(yù)測分子量：30.2kDa

實(shí)際分子量：-(差異分析請參閱說明書)

片段與標(biāo)簽：Thr651~Gln876 (Accession # Q15139) with

緩沖液成份：磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）

性狀：凍干粉

純度：> 95%

等電點(diǎn)：6.5

應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg

標(biāo)簽選擇：

親和標(biāo)簽：蛋白重組表達(dá)過程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用：一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易；另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋白可溶。蛋白標(biāo)簽可分兩類：一類是短肽類標(biāo)簽；一類是長肽以融合蛋白（fused partner）形式共表達(dá)。使用不同的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)具體案例來分析。

不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的，大致步驟如下：

真核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟：

a.      選擇表達(dá)載體和宿主細(xì)胞（常用的CHO和HEK293）

b.      表達(dá)載體的構(gòu)建

c.      無內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提

d.      細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染

e.      表達(dá)小試，條件優(yōu)化

f.       表達(dá)分析和鑒定（SDS-PGAE和WB）

g.      大量表達(dá)

h.      親和純化

i.        檢測和鑒定

原核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟：

a.      選擇表達(dá)載體

b.      密碼子優(yōu)化

c.      基因合成/亞克隆

d.      轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株

e.      蛋白表達(dá)小試分析

f.       如果蛋白可溶，蛋白親和純化

g.      如果蛋白不可溶，則需要變復(fù)性來制備可溶蛋白。

h.      鑒定，包括SDS-PAGE和WB鑒定

GZMH蛋白；表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測

　　誘導(dǎo)表達(dá)成功后，表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測應(yīng)該順當(dāng)，按一般的實(shí)驗(yàn)步驟做沒太大的問題。

注意事項(xiàng)：  

1、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時間有所不同，應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間。

2、雖然作用溫和，但能硬化組織，固定時間過久會導(dǎo)致組織變脆，切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過 24 小時。

3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色，影響免疫組化結(jié)果。因此，4%固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測時，有時需要對抗原先進(jìn)行修復(fù)，然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。

4、本產(chǎn)品對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

5、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作

相關(guān)產(chǎn)品：

胞漿型磷脂酶A2(PLA2G4)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達(dá) 性狀：凍干粉

白介素1受體關(guān)聯(lián)激酶3(IRAK3)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達(dá) 性狀：凍干粉

蛋白二硫化物異構(gòu)酶A2(PDI)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達(dá) 性狀：凍干粉

操作步驟 ：

根據(jù)使用量，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF，使 PMSF 的zui終濃度為 1mM。混勻備用（PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加）。

1、樣品前處理：

a)對于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。

b)對于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成 50-100 萬細(xì)胞/管，然后再裂解。

c)對于組織樣品： 切成細(xì)小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

2、后處理：

將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。

住白細(xì)胞原蟲屬通用PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Leucocytozoon spp.PCR

棕蜱通用PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Rhipicephalus spp.PCR

豬瘟病毒PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Classical Swine Fever Virus(CSFV)RTPCR

豬類圓線蟲PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Strongyloides ransomiPCR

大鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISA試劑盒 ，英文名： PⅠCP ELISA Kit

Mouse erythropoietin receptor (EPOR) ELISA Kit 小鼠紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)ELISA試劑盒

Mousehydroxyproline,HypELISAKit 小鼠羥脯(Hyp)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanSolubleprotein-100B,S-100BELISAKit人S100B蛋白規(guī)格：48T/96T

通用型乙酰酯酶活性比色法定量檢測試劑盒50次

ELISAKitPGE1大鼠前列腺素E1規(guī)格：48T/96T

蛋白激酶D1(PKD1)重組蛋白卵形瘧原蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Plasmodium ovalePCR

羅氏沼蝦諾達(dá)病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Macrobrachium Rosenbergii Nodavirus(MrNV)RTPCR

螺桿菌通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Helicobacter spp.PCR

呂氏泰勒蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Theileria lowenshuniPCR