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小鼠淋巴瘤細胞;EL4培養操作流程

閱讀:309          發布時間:2024-10-5

    在完成了小鼠淋巴瘤細胞EL4的基本準備與復蘇步驟后,接下來是細胞培養的關鍵階段。首先,將復蘇后的EL4細胞懸液輕輕吹打均勻,以避免細胞團塊的形成,這有助于細胞在培養環境中的均勻分布和生長。隨后,使用臺盼藍染色法檢測細胞活力,確保大部分細胞保持活性,為后續的實驗提供可靠的細胞基礎。

     接著,根據實驗需求調整細胞密度,通常將細胞懸液稀釋至適宜的濃度后,接種至預先準備好的含有培養基(包括RPMI-1640培養基、10%胎牛血清、雙抗等)的培養瓶中。注意在接種過程中避免產生氣泡,氣泡可能會干擾細胞貼壁或造成培養基分布不均。

    培養瓶置于37℃、5% CO2的恒溫培養箱中培養,這是維持EL4細胞正常生長代謝的必要條件。每日需觀察細胞生長情況,包括形態、密度及培養基的顏色變化,以判斷是否需要更換新鮮培養基或進行傳代培養。一般而言,當細胞密度達到80%-90%時,應進行傳代操作,以避免細胞因過度生長而衰老或死亡。

    在傳代時,首先輕輕吸去舊培養基,加入適量PBS緩沖液洗滌細胞表面,去除殘留的培養基和死細胞。然后,加入適量胰酶進行消化,待細胞邊緣變圓、輕輕搖晃即可脫落時,立即加入含血清的培養基終止消化。通過輕柔吹打使細胞分散成單細胞懸液,并按需進行傳代接種或收集細胞進行后續實驗。

     通過精心細致的操作和持續的觀察,可以確保EL4細胞在體外培養過程中保持穩定的生長狀態,為后續的科學研究提供可靠的細胞模型。

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