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技術文章

麥ubiquitine 基因核酸檢測試劑盒試劑準備

閱讀:273          發布時間:2021-10-13

麥ubiquitine 基因核酸檢測試劑盒試劑準備:


1. DNA模板


2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)


3.10×PCR Buffer


4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM


5.Taq酶操作步驟 


1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。


      10×PCR buffer             5μl


      dNTP mixl                 4μl


       引物1(10pM)               2μl


       引物2(10PM)              2μl


       Taq酶(2U/μl)            1μl


      DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl


      加ddH2O至               50 μl


    視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。


2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。


3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。


4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。


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