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技術文章

小鼠elisa檢測試劑盒實驗中的間接法

閱讀:341          發布時間:2018-9-26

      小鼠elisa檢測試劑盒自從60-70年代問世以來,得到*科研工作者的認可及推崇,在歐美及中國獲得很大的推廣,尤其是國內生化領域的長足發展。 Elisa試劑盒生物試驗是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法。

   Elisa試劑盒間接法的操作步驟為以下幾點:

   1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜;

   2.次日洗滌3次;

   3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌;

   4.(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml;

   5.37℃孵育35-60分鐘,洗滌;

   6.zui后一遍用DDW洗滌。

   7.加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

   8.終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

   9.結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+"、“-"號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

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