人拓撲異構酶I ICE檢測試劑盒（無抗體）：

TopoGEN在拓撲異構酶靶向細胞篩選方面擁有豐富的經驗。TopoGEN科學家團隊開發并發表了一種檢測活細胞中共價拓撲異構酶/基因組DNA復合物的方法（1,2），該方法在該領域得到了廣泛應用。該方法稱為ICE測定（體內酶復合物），最初需要CsCl梯度來純化基因組DNA和特異性拓撲異構酶抗體，以檢測DNA組分中捕獲的拓撲異肽。這種方法雖然強大，但速度慢，勞動強度大，需要大型昂貴的設備。TopoGEN修改了該技術，允許在一步中直接分離DNA/topo復合物，省略了CsCl梯度步驟，并迅速提高了該方法的通量（見下圖）。

特異性的關鍵是使用TopoGEN的高度定向抗體試劑來檢測復合物。ICE檢測可以在一天半內進行，第二天一早就能看到結果。只要進行適當的控制并使用單特異性抗體試劑，幾乎可以在任何細胞或組織系統上進行分析。最后，該分析不再局限于每次運行6個樣本（對于超速離心機轉子），因此可以實現更大的通量。TopoGEN的新ICE方法快速方便，可用于任何拓撲異構酶靶標（I、II、III）。

高通量體內酶復合物（ICE）測定，用于測量內源性拓撲異構酶/基因組DNA共價復合物。一天的程序不需要CsCl離心步驟。ICE檢測試劑盒具有拓撲特異性，因為TopoGEN提供與拓撲/DNA復合物相對應的抗體。

艾美捷人拓撲異構酶I ICE檢測試劑盒（無抗體）（#TopoGEN-TG1020-0）內容：

拓撲異構酶ICE檢測試劑盒中包含足夠進行24次檢測的材料（每次檢測需要一個60毫米的培養皿）。

特定抗體為每個試劑盒定義目標酶。

1、喜樹堿（隨拓撲異構酶I試劑盒提供）：凍干粉；用0.25毫升DMSO重懸以制備10 mM的庫存溶液。

2、依托泊苷（隨拓撲異構酶IIα和IIβ試劑盒提供）：凍干粉；用0.25毫升DMSO重懸以制備10 mM的庫存溶液。

3、用于裂解和DNA制備的A-E緩沖液。

4、每個試劑盒都配有特定的抗體：

無抗體（客戶自備）（目錄號TG1020-0）

針對人拓撲異構酶I的抗體（目錄號TG1020-1）。

針對人拓撲異構酶IIα的抗體（目錄號TG1020-2a）

針對拓撲異構酶IIβ的抗體（目錄號TG1020-2b）

針對拓撲異構酶IIIα的抗體（目錄號TG1020-3a；包含拓撲異構酶I抗體對照）。

針對拓撲異構酶IIIβ的抗體（目錄號TG1020-3b；包含拓撲異構酶I抗體對照）。

*由于沒有經過驗證的拓撲異構酶IIIα或β的毒物，我們包含拓撲異構酶I作為對照。通過包含拓撲異構酶I抗體和喜樹堿，您可以確保ICE檢測按預期工作。

TG1020-1REF說明：

作為TopoGEN人類拓撲異構酶ICE檢測試劑盒的配套對照/參考，TopoGEN提供方便的內部控制，以有效評估和驗證結果。該參考文獻是從用喜樹堿處理的細胞和相應的陰性藥物對照制備的基因組DNA。TG1020-1REF產品具有非常高的+藥物：無藥物基因組DNA（來自Hela細胞）的比例，對應于理想的ICE Delta（或ICE-D）。該參考對照DNA是人類Top共價復合物ICE檢測試劑盒的配套產品。TopoGEN實際上提供了兩種基因組DNA參考：一種來自未經處理的人類細胞，另一種來自用喜樹堿（30分鐘2.5μM）處理的人細胞。如果您以前從未進行過ICE檢測，這些REFS將幫助您在自己的實驗室中快速有效地建立檢測。

樣本數據顯示了REF標記DNA的特異性（用單克隆抗體檢測人Top的印跡）。產品中包含兩種基因組DNA（NEG和POS或陰性CPT和陽性CPT處理的基因組DNA）。還顯示了VP16處理的對照（未包括在內），顯示該測定對Top的反應與預期一致。

人拓撲異構酶I ICE檢測試劑盒（無抗體）文獻參考：

1.  Subramanian, D., Furbee, C. and Muller, M. (2000) ICT Bioassay:  Isolation of In Vivo Complexes of Enzyme to DNA.  DNA Topoisomerase Protocols Vol. II: Enzymology and Drugs.  Humana Press.

2.  Subramainian, D., Kraut, E., Staubus, A., Young, D., and Muller, M.T. (1995) Analysis of Topoisomerase I DNA complexes in patients administered topotecan.  Cancer Research 55:2097-2103.