MolBoolean Mouse/Rabbit（貨號：ATL-MolB00001 ） 是一種用于組織和細胞中原位蛋白質鄰近分析的試劑盒。MolBoolean 分析利用專有的寡核苷酸設置，能夠同時檢測兩種目標蛋白質（蛋白 A、蛋白 B 和相互作用蛋白 AB）的游離和相互作用（~40 nm 鄰近）組分。

MolBoolean 小鼠/兔應使用用戶選擇的一抗（在小鼠和兔中產生）進行。MolBoolean 依靠抗小鼠和抗兔次級接近探針和滾環放大 （RCA） 作為放大信號的手段。

在 MolBoolean 分析中執行的一系列分子步驟將信息整合到擴增產物中，表明抗體靶標與相互作用蛋白的結合。該信息通過檢測報告基因的結合轉換為熒光信號，從而可以在常規熒光顯微鏡上進行可視化。提供圖像分析軟件來分割和區分熒光信號，從而能夠相對定量樣品中兩個分析蛋白質靶標的游離組分與相互作用組分。

MolBoolean 試劑盒包含15個獨立的試管。試劑盒體積為4.8 ml，可在細胞中進行約120次檢測(40 μl/assay)，在組織中進行約60次檢測(80 μl/assay)。

艾美捷MolBoolean Mouse/Rabbit（#ATL-MolB00001）成分：

TUBE NUMBER TUBE ID

1 Blocker(4x)

2 Diluent(1x)*

3 Probe A(80x)

4 Probe B(80x)

5 Circle(40x)

6 Additive(40x)

7 Buffer A(10x)

8 Nickase enzyme(80x)

9 Buffer B(8x)

10 Tag oligos(40x)

11 Ligase enzyme(80x)

12 Polymerase enzyme(40x)

13 Buffer C(5x)

14 Detection oligos(40x)

15 Buffer D(10x)

*使用前，將Tween-20加入Diluent (1x) (tube 2) 至終濃度為0.1% (v/v) 制備“w全稀釋劑"

在10ml TBS中加入0.2 ml Tween-20，制備2% (v/v)的Tween-20中間溶液。用玻璃燒杯和磁力攪拌器攪拌10分鐘。

用Diluent (1x)  (e.g. 25 ul of 2 % Tween-20 intermediate to 475 ul Diluent)稀釋得到最終的w全稀釋液。將w全稀釋液保存在4°C，并在1周內使用。

為什么選擇MolBoolean ?

通過同時檢測自由和相互作用的蛋白質，完成蛋白質相互作用的空間定量分析。

通過相互作用數據歸一化到總目標蛋白水平的精確定量。

無需工程蛋白表達的生物學相關數據。

通過滾動圈放大，熒光信號增加1000倍，允許檢測和定量低豐度蛋白質。

適應不同的研究需求。

通用試劑盒，可用于客戶選擇的一抗。

在細胞和組織中驗證。

MolBoolean Mouse/Rabbit檢測步驟：

MolBoolean 檢測包括七個步驟來檢測蛋白質是相互作用還是單獨存在

1.Proximity Probe Binding：探針與一抗結合。

2.探針臂雜交：探針臂與 DNA 環寡核苷酸雜交。

3.DNA 切口：在 DNA 中引入缺口以進行進一步處理。

4.標簽寡核苷酸摻入：將標記的寡核苷酸摻入 DNA 中。

5.DNA 連接：DNA 末端的連接。

6.Rolling Circle Amplification：擴增環狀 DNA 以增強信號。

7.檢測：結果的可視化和分析。

試劑盒運輸及儲存：

MolBoolean 小鼠/兔試劑盒可在固定細胞和FFPE組織樣本中進行MolBoolean分析。試劑盒體積，4.8 ml總工作體積，足以在細胞中進行大約120次檢測(40ul/assay)，在組織中進行60次檢測(80ul/assay)。40?l的測定體積應足以覆蓋1 cm2的樣品面積。相應地調整以匹配您的實驗設置。

MolBoolean試劑盒包含15個獨立的試劑盒管，這個工具箱是用干冰運輸的。收到后，將所有試劑保存在-20°C。Diluent (1x) 也可以在4°C下保存長達6個月。

關于MolBoolean:

克服原位聚乳酸限制

與原位聚乳酸等傳統方法相比，MolBoolean 具有多種優勢，可解決數據解釋中的關鍵空白，并提供更多信息

數據規范化

與MolBoolean，蛋白質相互作用的數量可以歸一化為目標蛋白質的總數。這是至關重要的，因為靶蛋白水平可以受到各種因素的影響，如細胞治療或疾病狀態。通過提供標準化的測量，MolBoolean 允許更準確的樣本之間的比較。

相互作用和非相互作用的檢測

分數:與傳統方法不同，MolBoolean?可以檢測細胞和組織中兩種蛋白靶標的非相互作用內源性組分及相互作用。更全面的檢測能力增加了可以從實驗中提取的空間信息，使研究人員能夠確定蛋白質相互作用的位置。

一致的分子過程

滾動循環產品(rcp)源于自由或相互作用的蛋白質是通過相同的分子過程步驟產生的。這確保了均勻的信號效率，減少了數據分析過程中的不確定性。

總體而言，MolBoolean 為檢測蛋白質相互作用提供了更可靠、更全面的解決方案，解決了數據解釋中的關鍵空白，并為研究人員提供了更準確的細胞和組織中分子相互作用的見解。