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初級(jí)會(huì)員 | 第6年

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SIN載體,抗CD 19 CAR慢病毒(CD 19 ScFv-CD 8 -4- 1BB-CD 3 z)方案

時(shí)間:2024/8/6閱讀:155
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CD19 CAR慢病毒是復(fù)制能力不強(qiáng)、基于HIVVSV-G假型慢病毒顆粒,已準(zhǔn)備好轉(zhuǎn)導(dǎo)大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞,包括原代細(xì)胞和非分裂細(xì)胞。這些病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)與第二代CAR(嵌合抗原受體)連接的抗CD19(克隆FMC63)的ScFv部分,該部分含有CD8鉸鏈和跨膜結(jié)構(gòu)域、4-1BBCD3ζ信號(hào)結(jié)構(gòu)域。該構(gòu)建體還包括抗CD19 CAR盒下游的IRES增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(eGFP)序列,以促進(jìn)轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的分析和分選(圖1)。

 

41.png



1。(A) 用于產(chǎn)生抗CD19 CAR慢病毒的慢病毒載體示意圖。該向量是SIN向量,它包含eGFP。(B) 構(gòu)建顯示抗CD19 CAR成分的圖。

注:該產(chǎn)品轉(zhuǎn)導(dǎo)的抗CD19 CAR構(gòu)建體(CD19 ScFv-CD8-4-1BB-CD3ζ)與其他可用的抗CD19CAR慢病毒(BPS Bioscience#786007860178602)相同,但在關(guān)鍵方面有所不同。該產(chǎn)品含有eGFP報(bào)告/選擇標(biāo)記,因此可以根據(jù)eGFP表達(dá)對(duì)轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞進(jìn)行分類。請(qǐng)參閱表1

 

艾美捷CD19 CAR慢病毒CD 19 ScFv-CD 8 -4- 1BB-CD 3 zeGFP#BPS-78775

提供形式:50微升的抗CD19 CAR,滴度≥3×10^8 TU/ml。每批的滴度可能會(huì)有所不同;確切的數(shù)值會(huì)隨每次發(fā)貨提供。

配方這些慢病毒是從HEK293T細(xì)胞生產(chǎn)的,經(jīng)過濃縮并重新懸浮在DMEM中。

儲(chǔ)存/穩(wěn)定性慢病毒隨干冰發(fā)貨。長期儲(chǔ)存建議在-80°C下保存慢病毒,自收到之日起可保存長達(dá)12個(gè)月。避免重復(fù)凍融。每次凍融都可能導(dǎo)致滴度顯著下降。

培養(yǎng)基

T細(xì)胞培養(yǎng)基:TCellM™(BPS Bioscience #78753)補(bǔ)充了10 ng/ml的白介素-2BPS Bioscience #90184)。

實(shí)驗(yàn)所需的培養(yǎng)基

解凍培養(yǎng)基3BPS Bioscience #60186):F-12K培養(yǎng)基(Kaighn對(duì)Ham's F-12培養(yǎng)基的改良)補(bǔ)充了10% FBS1%青霉素/鏈霉素。

應(yīng)用作為T細(xì)胞中抗CD19 CAR評(píng)估的陽性對(duì)照。

轉(zhuǎn)導(dǎo)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。

生成抗CD19 CAR-T細(xì)胞(僅限研究使用,不用于治療目的)。

運(yùn)輸溫度:-80°C

 

CD 19 CAR慢病毒(CD 19 ScFv-CD 8 -4- 1BB-CD 3 z; SIN載體)相關(guān)產(chǎn)品:

Anti-CD19 CAR / NFAT (Luciferase) Reporter Jurkat Cell Line (CD19 SCFV-CD28-4-1BB-CD3ζ)

Anti-CD19 CAR-T Cells

Firefly Luciferase CD19 Knockout Raji Cell Line

CD19 Knockout Raji Cell Line

Firefly Luciferase CD19 Knockout NALM6 Cell Line

Human NK Cell Isolation Kit


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