SiaFind α2,3-特異性Lectenz 是一種唾液酸親和試劑，用于檢測、分離和富集終止于Neu5Acα2,3Gal的唾液聚糖，常見于糖綴合物（糖蛋白、糖脂和低聚或多糖）。它對聚糖上的α2，3連接的唾液酸具有高親和力和特異性。但是，它不綁定有效地與支鏈唾液酸化表位如唾液酸化Lewis A/X結(jié)合。該試劑可用作各種應(yīng)用。

SiaRich α2,3-特異性柱（Cat#SC2301）是SiaFind α2，3-特異性Lectenz 偶聯(lián)柱，用于通過親和色譜法快速富集和純化α2，3連接的唾液聚糖結(jié)合物。特異性結(jié)合的唾液酸化糖蛋白或其他生物分子可以競爭性或非競爭性地從柱洗脫。

對于HEK細(xì)胞中表達(dá)的Robo1-GFP，使用SiaRich α2,3-特異性色譜柱，富集了α2,3-連接的唾液酸化糖型。使用生物素標(biāo)記的SiaFind α2,3-特異性Lectenz 作為主要探針，通過Western印跡法檢測確認(rèn)了富集的效果。

Sia Rich a2,3-特異性色譜柱形式和存儲：

SiaRich 親和柱已預(yù)包裝并準(zhǔn)備好FPLC。它在SiaFind 結(jié)合緩沖液3（SBB3；25mM EPPS，110mM NaCl，pH 7.5）中提供。自生產(chǎn)之日起，它在4°C下穩(wěn)定三個月。切勿凍結(jié)柱。

所有5X緩沖液應(yīng)使用超純水稀釋至1X。例如，為了制備250 mL，將50 mL任何5X緩沖液加入200 mL水中，并通過倒置混合。所有緩沖器可儲存在4至25°C的溫度下。

如何使用SiaRich α2,3-Specific Column進(jìn)行親和色譜分離？

1. 準(zhǔn)備緩沖液：使用5倍濃縮的結(jié)合緩沖液（產(chǎn)品編號BA0103）制備1X SiaFind 結(jié)合緩沖液3，以及使用5倍濃縮的再生緩沖液（產(chǎn)品編號BA0301）制備1X SiaFind 再生緩沖液1。

2. 平衡柱：以1 mL/min的速度用5 mL的SBB3平衡柱。

3. 注射樣品：以0.5 mL/min的速度注射待分析物。s次運行推薦使用400 μg的胎蛋白（fetuin）溶于1 mL SBB3。

4. 洗脫柱：以1 mL/min的速度用10 mL的SBB3洗脫柱。

5. 洗脫結(jié)合的分析物：非競爭性地用5 mL的SRB1洗脫，或競爭性地用5 mL的50 mM 3'-唾液乳糖（溶于SBB3）洗脫，速度為1 mL/min。

注意：3'-唾液乳糖中的雜質(zhì)可能導(dǎo)致280 nm處顯著吸收，人為增加洗脫峰。

6. 再生柱：用5 mL的SRB1以1 mL/min的速度再生柱。

7. 重復(fù)步驟1：為下一次運行或短期存儲柱子做準(zhǔn)備。

8. 長期存儲：可選步驟，用含有20%乙醇的5 mL SBB3（5X SBB3:H2O:乙醇的1:3:1混合物）填充柱子。

9. 柱子的重復(fù)使用：直到洗脫峰中包含的胎蛋白少于注射的400 μg時，柱子可以重復(fù)使用。

10. 注意事項：

對于復(fù)雜樣品（如細(xì)胞提取物），可能需要以更慢的流速注射以z大化結(jié)合。

濃縮樣品必須在SBB3中充分稀釋以確保與柱子的最佳結(jié)合。

進(jìn)行下游分析，如使用SiaFind α2,3-Specific Lectenz 進(jìn)行西方印跡（Western Blot），以確認(rèn)α2,3-連接的唾液酸糖綴合物的富集。