聚集體是聚集的、錯誤折疊的蛋白質(zhì)形成的包涵體，當(dāng)泛素-蛋白酶體蛋白質(zhì)降解機(jī)制不堪重負(fù)時，它們就會形成。通常，聚集體是在細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)下形成的，并提供了一種通過隔離錯誤折疊的蛋白質(zhì)來保護(hù)細(xì)胞的機(jī)制，最終通過自噬作用清除這些蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)聚集體的形成還是多種人類疾病的特征，如阿爾茨海默病、帕金森病、肌萎s側(cè)索硬化癥或酒精性肝病。

本試劑盒中包含的PROTEOSTAT聚集體檢測試劑是一種分子轉(zhuǎn)子染料。在溶液中，沿著單個中心鍵的自由內(nèi)旋轉(zhuǎn)阻止了熒光。PROTEOSTAT染料特別能夠插入到通常在錯誤折疊和聚集的蛋白質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的四聚體蛋白結(jié)構(gòu)的交叉β脊柱中，這將抑制染料的旋轉(zhuǎn)并導(dǎo)致強(qiáng)烈的熒光。

PROTEOSTAT聚集體檢測試劑盒提供了一種快速、特異性和定量的方法來標(biāo)記細(xì)胞中的聚集體，消除了對人工蛋白質(zhì)突變的需求。PROTEOSTAT染料已在廣泛的條件下以及與小分子調(diào)節(jié)劑一起進(jìn)行了驗(yàn)證，證明了其適用于化合物篩選。此外，它還適用于多重共免疫熒光，以研究自噬和聚集體形成背景下的感興趣目標(biāo)。

艾美捷PROTEOSTAT聚集體檢測試劑盒（ENZ-51035-0025）：

應(yīng)用：流式細(xì)胞術(shù)、熒光顯微鏡、熒光檢測。

應(yīng)用說明：PROTEOSTAT 聚集體檢測試劑盒的檢測方法可能適用于識別抑制聚集體形成的小分子，以及在聚集蛋白質(zhì)貨物和涉及聚集體形成的各種蛋白質(zhì)（如組蛋白去乙酰化酶6、帕金蛋白、共濟(jì)失調(diào)蛋白3、動力蛋白復(fù)合體和泛素蛋白-1）之間的免疫定位研究。

質(zhì)量控制：每個批次的PROTEOSTAT 聚集體檢測試劑盒的樣本被用來對Jurkat細(xì)胞進(jìn)行染色，并通過流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行分析，使用用戶手冊中描述的程序。樣本的聚集體活性因子（AAF）值大于25。

數(shù)量：對于 ENZ-51035-0025：25次流式細(xì)胞術(shù)檢測或50次顯微鏡檢測。

對于 ENZ-51035-K100：100次流式細(xì)胞術(shù)檢測或200次顯微鏡檢測。

使用/穩(wěn)定性：在適當(dāng)?shù)膬Υ鏃l件下，試劑盒組分從收貨日期起穩(wěn)定一年。

處理：避光保護(hù)。避免反復(fù)凍融。

運(yùn)輸：使用藍(lán)冰。

短期儲存：-20°C。

長期儲存：-80°C。

內(nèi)容物：

PROTEOSTAT®聚集體檢測試劑、

Hoechst 33342 核染色劑、

蛋白酶體抑制劑（MG-132）、

10X 檢測緩沖液。

PROTEOSTAT聚集體檢測試劑盒特色：

提供了一種敏感的基于細(xì)胞的藥物反應(yīng)性檢測，用于在真實(shí)的細(xì)胞環(huán)境中識別與神經(jīng)退行性疾病相關(guān)的抑制劑。

可靠且簡單的檢測不需要非生理性的蛋白質(zhì)突變或遺傳工程化的細(xì)胞系。

在廣泛的條件和小分子調(diào)節(jié)劑下進(jìn)行了驗(yàn)證，證明了其適用于篩選具有潛在治療價值的化合物。

固定細(xì)胞檢測優(yōu)化了抗體共定位研究。

通過流式細(xì)胞術(shù)容易量化聚集體和相關(guān)包含體。

適用于神經(jīng)退行性疾病、肝病、毒理學(xué)研究等眾多領(lǐng)域的研究。

α-syn混合物在細(xì)胞質(zhì)膜上形成聚集體，這些聚集體被內(nèi)化為M17神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系。用α-syn單體（M）、超聲處理的α-syn PFFs（F）或α-syn混合物（M+F）處理M17細(xì)胞。4天后，M17細(xì)胞在固定前洗滌3次，然后用PROTEOSTAT®聚集染料（綠色）染色，并對α-syn（紅色）和β-catenin（灰色）進(jìn)行免疫染色。比例尺=20µm。經(jīng)“纖維蛋白生長和播種能力在α-突觸核蛋白介導(dǎo)的凋亡細(xì)胞死亡中起關(guān)鍵作用"作者許可使用的圖像。A-L Mahul Mellier等人；細(xì)胞死亡與分化（2015）。（doi:10.1038/cdd.205.79）。

PROTEOSTAT聚集體檢測試劑盒文獻(xiàn)參考：

Cyclophilin A supports translation of intrinsically disordered proteins and affects haematopoietic stem cell ageing: L. Maneix, et al.; Nat. Cell Biol. 265, 593 (2024)

Immunofluorescence and Aggresome Staining of Nothobranchius furzeri Cryosections: S. Bagnoli, et al.; Cold Spring Harb. Protoc. (2023)

Immunofluorescence and Aggresome Staining of Nothobranchius furzeri Cryosections: S. Bagnoli, et al.; Cold Spring Harb. Protoc. 2023, 693 (2023)