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異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記抗體流程

時間:2024/4/7閱讀:180
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FITC(異硫氰酸熒光素)能夠與各種抗體蛋白結(jié)合,同時不失去對特定抗原的特異性識別能力。一旦結(jié)合,抗體在堿性溶液中會表現(xiàn)出強(qiáng)烈的黃綠色熒光。通過在熒光顯微鏡下觀察或使用流式細(xì)胞儀分析,可以進(jìn)行對應(yīng)抗原的定性、定位或定量檢測。FITC在醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)和獸醫(yī)學(xué)等多個領(lǐng)域被用于快速診斷由細(xì)菌、病毒、寄生蟲和其他病原體引起的疾病。

 

艾美捷異硫氰酸熒光素相關(guān)參數(shù):

產(chǎn)品編號:B-CHM100

規(guī)格:100毫克

存儲條件:在避光的條件下,存放于-20°C

分子式:C21H11NO5S

分子量:389.38

純度:高于或等于95%(通過高效液相色譜法測定)

光譜特性:激發(fā)/發(fā)射波長 = 490 / 525 納米

外觀:黃色粉末

運(yùn)輸與儲存

儲存條件:在避光的條件下,存放于-20°C。穩(wěn)定性:在適當(dāng)?shù)膬Υ鏃l件下,至少穩(wěn)定12個月。

 

異硫氰酸熒光素標(biāo)記抗體流程:

1. 將要進(jìn)行交聯(lián)的蛋白質(zhì)(濃度為1 mg/mL)在4°C下對交聯(lián)反應(yīng)緩沖液進(jìn)行三次透析,調(diào)整pH值至9.0。制備交聯(lián)緩沖液:將7.56克碳酸氫鈉、1.06克碳酸鈉和7.36克氯化鈉溶解在水中,最終體積為1升。

2. FITCDMSO中溶解,濃度為1 mg/mL。為每次交聯(lián)反應(yīng)新鮮制備FITC溶液,并避免光照。

3. P:F(蛋白質(zhì):FITC= 1 mg:150 μg的比例,緩慢地將FITC加入抗體溶液中。在加入FITC時輕輕攪拌溶液,以確保與抗體均勻混合。在4°C的暗處進(jìn)行反應(yīng)8小時。

4. 加入5 mol/L的氯化銨至最終濃度為50 mmol/L,以在4°C下停止反應(yīng)2小時。

5. 將結(jié)合物對PBS溶液進(jìn)行至少四次透析,直到透析液變清。

6. 交聯(lián)材料的特征化:蛋白質(zhì)濃度(mg/mL= [A280 - 0.31 × A495] / 1.4F/P比值:3.1 × A495 / [A280 - 0.31 × A495]。這個值應(yīng)該在2.5 ~ 6.5之間。

7. FITC蛋白結(jié)合物在pH 7.4PBS中保存,添加0.1%的亞硝酸鈉和1%的牛血清白蛋白(BSA),在4°C的暗處保存。

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