VitroCol,人去端膠原溶液是一種 3 mg/ml I 型人去端膠原溶液,用于 2D 和 3D 細胞培養,或作為膠原蛋白標準品。 VitroCol 膠原蛋白由人類新生兒成纖維細胞自然分泌,然后經過加工和純化,產生天然產生的人類膠原蛋白。 VitroCol 設定了純度標準(膠原蛋白含量 >99%)。 VitroCol 大約 97% 為 I 型人類膠原蛋白,其余為 III 型膠原蛋白。每個特定批次的濃度均在購買每個產品時提供的分析證書上提供。 VitroCol 是可溶于 0.01 N HCl 的去端肽膠原,因此 pH 值為 2。當涂覆表面、提供培養細胞薄層制劑或用作固體凝膠時,VitroCol 特別適合人類細胞培養系統。 VitroCol 人類膠原蛋白采用用戶友好的包裝提供,以便使用和儲存。 VitroCol 經過無菌過濾,以即用型溶液形式提供。
艾美捷VitroCol,人去端膠原溶液(ABM-5007-20ML)儲存/穩定性:
存放在2-10攝氏度,并在冷凍膠凍包裝中發貨。不要冷凍。產品標簽和每個特定批次的分析證書上列有過期日期。當產品按照指示進行處理和存儲時,過期日期有效。注意事項和免責聲明本品僅供研發使用,不適用于人類或其他用途。請查閱有關危害和安全操作規程的材料安全數據表。
涂層程序說明:請將以下建議作為指導,以確定您培養系統的合適涂層條件。
1. 從瓶中取出所需量的膠原蛋白,放入稀釋容器中。
2. 將VitroCol®稀釋至約50至100 µg/ml(約1:30)的水中。也可以使用0.01N鹽酸溶液。
3. 輕輕攪拌混合物,直到完-全混合。
4. 向培養表面添加適量稀釋后的VitroCol®材料,確保整個表面都被涂層。
5. 在室溫下蓋好,孵育1-2小時。吸去任何剩余材料。或者,保持在室溫下,直到表面干燥。
6. 孵育后,吸去任何剩余材料。
7. 用無菌培養基或PBS仔細沖洗涂層表面,避免劃傷表面。
8. 涂層表面已經可以使用。如果保持無菌狀態,也可以在2-8°C潮濕或風干保存。
3D凝膠制備程序:
1. 緩慢地將冷卻的10倍PBS或10倍培養基的1份加入到冷卻的膠原溶液的8份中,輕輕攪拌。
2. 使用無菌0.1M氫氧化鈉將混合物的pH調整至7.0-7.5。仔細監控pH調整(pH計、酚紅或pH試紙)。
3. 使用無菌水將最終體積調整為10份。
4. 為防止凝膠化,保持混合物的溫度在2-10°C。
5. 要形成凝膠,加熱至37°C。等待90至120分鐘使凝膠形成。
VitroCol,人去端膠原溶液部分文獻參考:
1. Grinnell, F., Fibroblast biology in three-dimensional collagen matrices. Trends Cell Biol., 13, 264-269 (2003).
2. Beningo, K.A., et al., Responses of fibroblasts to anchorage of dorsal extracellular matrix receptors. Proc. Natl. Acad Sci. USA, 101, 18024-18029 (2004).
3. Zaman, M.H., et al., Migration of tumor cells in 3D matrices is governed by matrix stiffness along with cell-matrix adhesion and proteolysis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103, 10889-10894 (2006).
4. Jiang, H., and Grinnell, F., Cell-matrix entanglement and mechanical anchorage of fibroblasts in three-dimensional collagen matrices. Mol. Biol. Cell, 16, 5070-5076 (2005).
5. Heino, J., The collagen receptor integrins have distinct ligand recognition and signaling functions. Matrix Biol., 19, 319-323 (2000).
6. Heino, J., The collagen family members as cell adhesion proteins. BioEssays, 29, 1001-1010 (2007).
7. Ivaska, J., et al., Cell adhesion to collagen-is one collagen receptor different from another? Conn. Tiss., 30, 273-283 (1998).
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