人乳鐵蛋白(LTF)ELISA試劑盒操作注意事項：

1.試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

2.實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

3.不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

4.使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品

6.洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

7.底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

8.加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

9.按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

人乳鐵蛋白(LTF)ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法：

1.血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆

3.細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

人乳鐵蛋白(LTF)ELISA試劑盒操作步驟：

1.使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。

2.根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。

3.加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

4.甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6.甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

7.每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8.取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。

9.在450nm波長處測定各孔的OD值。

艾美捷Kamiya人乳鐵蛋白ELISA是一種高度靈敏的雙位點酶聯免疫測定（ELISA）人類生物樣品中乳鐵蛋白的測定。僅供研究使用。不用于診斷程序。

艾美捷Kamiya人乳鐵蛋白ELISA試劑盒試劑制備校準儀：

將1.0 ml蒸餾水或去離子水加入凍干人乳鐵蛋白校準儀中，并輕輕混合直至溶解。校準器現在的濃度為18.40µg/mL（重新配制的校準器應為如果打算將來使用，則立即冷凍）。需要準備人乳鐵蛋白校準品使用前立即（見下表）。在每一步之間充分混合。避免起泡。

艾美捷Kamiya人乳鐵蛋白ELISA試劑盒化驗規程：

樣品的稀釋：

由于測定的高靈敏度，在用于正常測定之前，應稀釋每個樣品。A 1:20血清或血漿稀釋適用于大多數樣本，而母乳樣本可能需要稀釋1:50000。

對于產生校準曲線范圍外結果的樣品的絕對定量，取較小值或較大值可能需要稀釋。如果不確定樣品水平，則在之前用一個或兩個代表性樣品進行連續稀釋強烈建議運行整個板。

為了制備1:20稀釋的樣品，將20µL樣品轉移到380µL 1X稀釋劑中。這樣可以得到1:20的稀釋度。混合非常為制備1:50000稀釋的樣品，將5µL樣品轉移至495µL 1X稀釋劑中。這給你一個1： 100稀釋。充分混合。然后，將2µL的1X稀釋劑轉移至998µL，稀釋1:100的樣品。對樣品進行1:50000稀釋。在每個階段充分混合。