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武漢艾美捷科技有限公司
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使用方法丨艾美捷Caspase-1活性分析試劑盒介紹

時間:2022/12/8閱讀:270
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如何動態(tài)檢測活細(xì)胞內(nèi)的Caspase-1的活性,做更真實的實驗艾美捷推薦Immunochemistry TechICTFLICA系列科研工具,輕松檢測活細(xì)胞Caspase-1 活性。  

 

艾美捷Immunochemistry Caspase-1活性分析試劑盒原理:

FLICA試劑FAM-YVAD-FMKEx/Em = 488nm/530nm),是無細(xì)胞毒性的,細(xì)胞膜滲透抑制劑。進(jìn)入每個細(xì)胞,并不可逆地與活化的caspase-1結(jié)合。任何未結(jié)合的FAM-YVAD-FMK-FLICA試劑擴(kuò)散出細(xì)胞并被沖走。因此留在細(xì)胞內(nèi)的綠色熒光直接體現(xiàn)了活性caspase-1酶活性的。熒光結(jié)果可通過熒光酶標(biāo)儀、熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析。

 

艾美捷Immunochemistry Caspase-1活性分析試劑盒組分:


638061117823356807764.jpg

 

推薦的材料:

DMSO,每小瓶50µL,用于重建FLICA

DiH20135-540 mL,稀釋10X凋亡洗滌緩沖液

•磷酸鹽緩沖鹽水(PBSpH 7.4,最高100mL,稀釋FLICA并處理細(xì)胞

•處理細(xì)胞時,將FBS/BSA添加到緩沖液中

•在實驗條件下處理的培養(yǎng)細(xì)胞或組織可隨時標(biāo)記

•誘導(dǎo)胱天蛋白酶活性并產(chǎn)生對照品如星孢菌素(#6212),喜樹堿(#6210)或尼格瑞林(#6698)

90%乙醇或3%甲醛,產(chǎn)生活/死碘化丙啶染色對照

•黑色96孔微量滴定板,平底,未處理,非無菌(ICT目錄#266)。如果使用底部讀數(shù)儀器,使用黑色板墻壁和透明的底部。如果在使用無菌黑色組織培養(yǎng)板。

•血細(xì)胞儀

200 x g離心

15 mL聚丙烯離心管(每個樣品)

 

Caspase-1活性分析試劑盒檢測設(shè)備:

可通過以下方法分析分析:

•熒光顯微鏡

•熒光板讀取器

•流式細(xì)胞儀

使用接近這些設(shè)置的過濾器對:

FAM-FLICA最佳激發(fā)波長為488-492 nm,峰值發(fā)射波長為515-535納米。

•在長通濾波器下觀察碘化丙啶(PI488-492nm,發(fā)射>610nm;核結(jié)合PI617nm處具有最大發(fā)射。

•使用365 nm激發(fā)的紫外濾光片可以看到Hoechst 33342以及480nm的發(fā)射。

 

實驗準(zhǔn)備:

FLICA染色細(xì)胞可以在幾個小時內(nèi)完成。然而FLICA用于活細(xì)胞,需要定期維護(hù)和提前幾天栽培。此外,一旦正確的數(shù)字已經(jīng)培養(yǎng)了個細(xì)胞,必須為實驗分配時間治療或半胱天冬酶激活過程。創(chuàng)建細(xì)胞群,例如:

a、 暴露于實驗處理的細(xì)胞

b、 接受安慰劑的陰性對照細(xì)胞群

當(dāng)FLICA檢測到催化活性形式的胱天蛋白酶時酶,計劃實驗,以使FLICA在細(xì)胞中預(yù)期胱天蛋白酶被激活時被稀釋和給藥。30X FLICA的推薦體積為每300µL細(xì)胞10µL3-5 x 105細(xì)胞/mL,但數(shù)量可能因?qū)嶒灦悧l件和用于分析的儀器。每位研究者應(yīng)調(diào)整FLICA的量以適應(yīng)特定細(xì)胞系研究條件。將細(xì)胞培養(yǎng)至適合特定實驗條件的最佳密度或凋亡誘導(dǎo)方案。細(xì)胞密度不應(yīng)超過106細(xì)胞/超過此濃度培養(yǎng)的細(xì)胞可開始自然生長進(jìn)入凋亡。可能需要進(jìn)行初步實驗來確定何時以及使用多少FLICA作為產(chǎn)生的正信號是培養(yǎng)過程中caspase活性的直接測量。


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