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在mRNA疫苗生產過程中,需要通過T7 RNA聚合酶體外轉錄(IVT, In Vitro Transcription)制備mRNA,在這一過程中會產生雙鏈RNA(dsRNA, double-stranded RNA)等副產物,dsRNA除了會觸發機體的天然免疫反應,還可能導致mRNA發生降解。所以dsRNA的殘留量是mRNA藥物的關鍵質量屬性,IVT制備mRNA時,需對殘留的dsRNA進行檢測和去除,以獲得免疫原性較低的功能性mRNA,同時提高mRNA表達水平。
因此,雙鏈RNA (dsRNA) 抗體及ELISA試劑盒常被應用于mRNA產品的質控環節。dsRNA抗體包括J2單克隆抗體(Anti-dsRNA mAb J2),J5單克隆抗體(Anti-dsRNA mAb J5),K1單克隆抗體(Anti-dsRNA mAb K1)和K2單克隆抗體(Anti-dsRNA mAb K2),其中J2抗體是dsRNA檢測的金標準。J2抗dsRNA IgG2a單克隆抗體已成為dsRNA檢測的金標準。它最初用于植物病毒的研究,但自從Weber等人在2006年的開創性論文發表以來,J2被用來證明所有正鏈RNA病毒在感染的細胞中產生的大量dsRNA,這種抗體已廣泛用于各種系統,有超過200多篇引用文獻。J2可用于檢測多種病毒的dsRNA中間體,如丙型肝炎病毒、登革熱病毒、鼻病毒、基孔肯雅病毒、狂犬病病毒、脊髓灰質炎病毒、豬瘟病毒、雀麥花葉病毒以及更多存在于培養細胞和固定石蠟包埋的組織學樣品中的病毒dsRNA。
艾美捷雙鏈RNA定量試劑盒,利用雙抗夾心ELISA原理,檢測核酸提取物中的病毒dsRNA或非病毒來源的天然或合成的dsRNA,以及檢測人工合成(m)RNA制劑中的dsRNA雜質。
艾美捷雙鏈RNA定量試劑盒原理:
基于使用兩種雙鏈 RNA (dsRNA) 特異性單克隆抗體,dsRNA 檢測試劑盒可以靈敏和選擇性地檢測 dsRNA 分子(大于 30-40 bp),而不受其核苷酸組成和序列的影響。檢測具有高度特異性:在存在 1.000-10.000 倍過量其他核酸的情況下,可以檢測核酸提取物中的dsRNA。該測定基于雙抗夾心ELISA原理,使用 J2 (IgG2a) 小鼠單克隆抗體作為捕獲抗體,單克隆抗體 K2 (IgM) 用作檢測抗體。
艾美捷雙鏈RNA定量試劑盒相關研究:
MBS574013 Mouse anti double-stranded RNA (J2) 0.2mg
MBS574015 Mouse anti double-stranded RNA (K1) 0.2mg
MBS574017 Mouse anti double-stranded RNA (K2) 5ml
MBS574019 Mouse anti double-stranded RNA (J5) 0.2mg
MBS574021 Mouse anti double-stranded RNA (J2, J5 and K1) Comparison Kit 3x0.1mg
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